分化相關(guān)基因NDRG1在食管鱗癌的表達(dá)及誘導(dǎo)分化治療研究.pdf

1、鄭州大學(xué)博士學(xué)位論文分化相關(guān)基因NDRG1在食管鱗癌的表達(dá)及誘導(dǎo)分化治療研究姓名：賀付成申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：病理學(xué)與病理生理學(xué)指導(dǎo)教師：張?jiān)茲h李惠翔20060528鄭州大學(xué)2006年博士研究生論文分化相關(guān)基因NDRGl在食管鱗癌的表達(dá)及誘導(dǎo)分化治療研究劑，如Nicl。、Ni。s。、同型半胱氨酸、2B一巰基乙醇、農(nóng)霉素、溶血磷脂膽堿、銀毛酸、維甲酸類、維生素D、佛波酯等可均可調(diào)節(jié)NDRGlmRNA或蛋白質(zhì)的表達(dá)。由于NDRGl可被多種

2、分化調(diào)節(jié)劑誘導(dǎo)表達(dá)，使NDRGlmRNA或蛋白質(zhì)的表達(dá)上調(diào)，因此，采用分化誘導(dǎo)劑誘導(dǎo)食管癌細(xì)胞，檢測NDRGl的表達(dá)及細(xì)胞增殖情況，有利于對食管癌誘導(dǎo)分化機(jī)制的探討。文獻(xiàn)檢索表明，有關(guān)NDRGl在食管鱗癌組織表達(dá)情況的研究，國外僅有l(wèi)篇文獻(xiàn)報(bào)道，國內(nèi)尚未見相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道，而用分化誘導(dǎo)荊全反式維甲酸(all—transretinoicacid，ATR^)、佛波酯(12一tetradecanoy卜phorbo卜13一acetate，TPA)、

3、l，25(oH)2VD3、丁酸鈉(sodiumbutyrate)等作用于人食管癌Ec9706細(xì)胞，檢測NDRGl基因表達(dá)的變化，國內(nèi)外均未見文獻(xiàn)報(bào)道。為系統(tǒng)地探討NDRGl在食管癌的表達(dá)情況，研究其與食管癌發(fā)生、發(fā)展的關(guān)系，了解分化誘導(dǎo)劑ATRA、TPA等對人食管癌Ec9706細(xì)胞NDRGl表達(dá)的影響及NDRGl基兇表達(dá)在細(xì)胞增殖中的作用，本文采用免疫組化sP法、原位雜交和RT—PcR等技術(shù)，檢測了49例高發(fā)區(qū)食管鱗癌組織、23例癌旁不

4、典型增生組織及49例正常粘膜中NDRGl的表達(dá)情況；采用免疫組化sP法、原位雜交、RT—PcR、細(xì)胞增殖抑制實(shí)驗(yàn)岍T法和流式細(xì)胞技術(shù)等檢測了分化誘導(dǎo)劑ATRA、TPA等作用于人食管癌Ec9706細(xì)胞后，NDRGl基因表達(dá)、細(xì)胞增殖及細(xì)胞周期的變化；采用RNA干擾技術(shù)，構(gòu)建pSuperneoGFPNDRGlsiRNA，并用脂質(zhì)體將其轉(zhuǎn)染入Ec9706細(xì)胞，觀察轉(zhuǎn)染后Ec9706細(xì)胞NDRGl基因表達(dá)及其與腫瘤生長、細(xì)胞增殖和細(xì)胞周期變化的

5、關(guān)系。在體外實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，本研究成功地構(gòu)建了裸鼠食管癌移植瘤動(dòng)物模型，并采用維甲酸、佛波酯等分化誘導(dǎo)劑對移植瘤進(jìn)行治療，分別觀察了移植瘤生長情況；抑制NDRGl基因表達(dá)后的轉(zhuǎn)染細(xì)胞移植瘤生長情況：并采用免疫組化技術(shù)檢測誘導(dǎo)分化荊治療后及RNAi后裸鼠移植瘤中NDRGl蛋白表達(dá)情況。通過以上實(shí)驗(yàn)，試圖闡明NDRGl在食管癌的表達(dá)規(guī)律；探討NDRGl基因在腫瘤細(xì)胞誘導(dǎo)分化過程中的作用：研究Ec9706細(xì)胞NDRGl基因表達(dá)與腫瘤生長、細(xì)胞增