人支氣管上皮細胞5-脂氧合酶介導(dǎo)的苯并(a)芘的活化及其細胞毒性.pdf

1、[目的]通過大豆脂氧合酶(SLO)介導(dǎo)苯并(a)芘(B[a]P)氧化反應(yīng)的體外酶系統(tǒng)實驗與苯并(a)芘對人支氣管上皮細胞(HBE)5-脂氧合酶（5-LOX）蛋白表達、細胞毒性和DNA損傷影響的細胞實驗研究，初步探討細胞內(nèi)5-LOX對苯并(a)芘的代謝活化情況，試圖為LOX作為細胞色素P450氧化代謝外源化學(xué)物的替代途徑提供進一步的參考依據(jù)。
　　 [方法]體外酶系統(tǒng)實驗：SLO與苯并(a)芘等在酶體系中進行反應(yīng)后，用分光光度法于

2、特定波長下檢測反應(yīng)體系中反應(yīng)產(chǎn)物生成情況，并計算SLO對苯并(a)芘氧化代謝速率及脂氧合酶抑制劑茶多酚(GTP)對氧化的抑制率。同時用紫外分光光度計及高效液相色譜法(HPLC)檢測苯并(a)芘與DNA的加合物。
　　 細胞實驗：以不同濃度的苯并(a)芘染毒HBE，通過MTT實驗檢測不同濃度苯并(a)芘對HBE存活率的影響；用western-blot印記法檢測各組5-LOX蛋白表達的情況；同時用流式細胞計數(shù)及單細胞凝膠電泳實驗檢測

3、各組的細胞毒性及DNA損傷情況。最后檢測特異性5-LOX抑制劑(AA-861)及其他特異性酶抑制劑對5-LOX蛋白表達和對DNA損傷的影響。
　　 [結(jié)果]體外酶系統(tǒng)中，過氧化氫(H202)參與下，SLO可介導(dǎo)苯并(a)芘協(xié)同氧化生成苯并(a)芘-7，8-環(huán)氧化物；抑制劑GTP可抑制該氧化反應(yīng)，且在一定范圍內(nèi)呈劑量效應(yīng)關(guān)系。SLO介導(dǎo)苯并(a)芘活化后，在體外未能檢測到與DNA形成加合物。苯并(a)芘可以使HBE內(nèi)5-LOX蛋白

4、表達增加，AA-861對5-LOX蛋白表達基本沒有影響；苯并(a)芘可以對HBE產(chǎn)生明顯細胞毒作用和DNA損傷，AA-861和前列腺素合酶抑制劑萘普生可以明顯抑制苯并(a)芘毒性和DNA損傷。
　　 [結(jié)論]H2O2參與下，SLO可以介導(dǎo)苯并(a)芘協(xié)同氧化，抑制劑GTP可以抑制該協(xié)同氧化反應(yīng)。5-LOX在HBE內(nèi)的蛋白表達可以經(jīng)苯并(a)芘調(diào)節(jié)，特異性5-LOX抑制劑AA-861對其蛋白表達無明顯影響。在HBE內(nèi)，苯并(a)芘