妊娠早期子宮微環(huán)境趨化因子表達(dá)及其生物學(xué)意義的研究.pdf

1、妊娠是一個復(fù)雜的牛理過程，從免疫學(xué)角度看妊娠過程類似于器官移植，帶父方異體抗原成分的胚胎，對母體而言是一個“移植物”，母體免疫系統(tǒng)對此進(jìn)行識別，并產(chǎn)生免疫應(yīng)答。就其結(jié)局而言妊娠過程不同于器官移植．母體能對“移植物”——胎兒識別，產(chǎn)生保護(hù)性免疫應(yīng)符(免疫耐受)，兇而，母胎之間的免疫平衡是維持正常奸娠的基礎(chǔ)。 研究發(fā)現(xiàn)，妊娠了寓內(nèi)膜中最主要的淋巴細(xì)胞是子宮自然殺傷細(xì)胞(uterine naturekiller cell，uNK)，

2、其數(shù)量在子宮內(nèi)膜的分泌中、晚期上升，在妊娠第三個月達(dá)到高峰(占淋巴細(xì)胞總量的70％～80％)。在胚胎植入和蛻膜形成時，uNK細(xì)胞的數(shù)量顯著上升并與侵入的滋養(yǎng)層細(xì)胞密切接觸，分泌多種細(xì)胞因子調(diào)節(jié)胚胎生長發(fā)育。對uNK細(xì)胞缺陷小鼠模型的研究發(fā)現(xiàn)其胚胎丟失率高達(dá)64％，另外uNK細(xì)胞缺陷小鼠無子宮內(nèi)膜腺體形成，胎盤明顯縮小，母體供胎盤血運的大血管畸形，此外，對病理性妊娠病人的研究也發(fā)現(xiàn)：uNK細(xì)胞缺失或表型改變直接導(dǎo)致病理性妊娠發(fā)生甚至妊娠失

3、敗，如習(xí)慣性流產(chǎn)(recurrent pregnancy loss，RPL)患者CD56brightCDl6<'->uNK細(xì)胞數(shù)量明顯低于對照組。這些研究均表明，uNK細(xì)胞參與胚胎植入和妊娠維持，在保持母胎免疫平衡和確保妊娠成功中起了至關(guān)重要的作用。 uNK細(xì)胞是NK細(xì)胞系中功能較為獨特的亞群，對其表型分析結(jié)果顯示：90％的uNK細(xì)胞為CD56<,bright>CDl6<'->，而90％的外周血NK(pNK)細(xì)胞為CD56<'d

4、im>CDl6<'+>。uNK細(xì)胞主要分布于母體與胚胎接觸的底蛻膜，能分泌一系列細(xì)胞因子促進(jìn)母胎界面的血管重建和Th2/Thl型細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)的平衡。許多因素調(diào)控其生長、發(fā)育及功能，如內(nèi)分泌激素、細(xì)胞因子及趨化因子等。蛻膜CD56brightCD16<'->NK細(xì)胞為何能在子宮內(nèi)大量聚集，并與異質(zhì)性細(xì)胞共存在免疫活性敏感的蛻膜中起重要的調(diào)節(jié)作用一直是人們關(guān)注的焦點。揭示蛻膜淋巴細(xì)胞聚集的機(jī)理有助于理解母體的耐受和各種妊娠期間的并發(fā)癥。研

5、究發(fā)現(xiàn)，趨化因子是調(diào)控uNK細(xì)胞選擇性聚集的關(guān)鍵因素。已發(fā)現(xiàn)的人類的趨化因子有50余種，根據(jù)其結(jié)構(gòu)主要分為4類，即CXC類(α類趨化因子)、CC類(β類趨化因子)、CX3C類(γ類趨化因子)和C類(δ類趨化因子)，其受體分別為CXCR、CCR、CX3CR和CR，每種趨化因子受體同時可與多種趨化因子結(jié)合。uNK細(xì)胞表面有多種趨化因子受體表達(dá)，同時母胎界面中有多種趨化因子表達(dá)，因此，趨化因子受體和配體相互作用可能在uNK細(xì)胞聚集中發(fā)揮重要作

6、用。 近年來的研究發(fā)現(xiàn)，uNK細(xì)胞表面高表達(dá)趨化因子受體CXCR3、CXCR4，而其它趨化因子受體表達(dá)均較低，因此認(rèn)為CXCR3、CXCR4配體表達(dá)可能是調(diào)控uNK細(xì)胞局部聚集的關(guān)鍵因素。CXC類細(xì)胞因子中，與淋巴細(xì)胞趨化有關(guān)的是干擾素誘導(dǎo)的單核因子(monokine induced by interferon，Mig)、干擾素誘導(dǎo)的蛋白10(γ interferoninducible protein 10，IP-10)、干擾

7、素誘導(dǎo)的T細(xì)胞趨化因子(interferon inducible T cella-chemoattractant，I-TAC)和基質(zhì)細(xì)胞源性細(xì)胞因子1(SDF-1)。關(guān)于SDF-1在妊娠早期uNK細(xì)胞聚集中作用的研究已取得了重要發(fā)現(xiàn)，表明此類趨化因子在uiNK細(xì)胞聚集及調(diào)控母胎界面免疫平衡中具有關(guān)鍵的作用。然而，趨化因子的調(diào)節(jié)作用往往是多因子的網(wǎng)絡(luò)調(diào)節(jié)效應(yīng)，單一因子的研究難以全面揭示其在妊娠過程母胎界面免疫耐受形成中的作用，基于此我們首

8、次分析了妊娠早期CD56<'+>uNK、CD56<'+>pNK細(xì)胞及蛻膜和/或絨毛組織中趨化因子受體CXCR3、CXCR4及其配體Mig、IP-10和SDF-1的表達(dá)，并觀察了雌、孕激素對妊娠早期蛻膜基質(zhì)細(xì)胞Mig、IP-10產(chǎn)生的調(diào)控作用，意在揭示Mig和IP-10在母胎免疫平衡調(diào)控中的作用。對妊娠早期子宮微環(huán)境CXC類趨化因子表達(dá)及其生物學(xué)意義的研究，將為理解正常的生殖生理及病理過程提供新思路，為發(fā)展新的診斷和治療策略提供新的線索。

9、 第一部分早孕母胎界面中趨化因子Mig、IP-10及其受體的表達(dá) 目的：研究早孕母胎界面中趨化因子Mig、IP-10和SDF-1及uNK細(xì)胞中相應(yīng)受體@XCR3、CXCR4的表達(dá)，探討二者相互作用在uNK細(xì)胞聚集及母胎免疫平衡中的作用。 結(jié)論：蛻膜組織和/或絨毛組織中表達(dá)的趨化因子Mig、IP-10、SDF-1可能通過與CD56<'+>NK細(xì)胞表面對應(yīng)的趨化因子受體CXCR3、CXCR4相互作用而影響早孕母胎

10、界面中CD56<'+>uNK細(xì)胞的聚集，從而對母胎間免疫平衡起調(diào)控作用。 第二部分子宮內(nèi)膜和蛻膜組織中趨化因子Mig、IP-10表達(dá)及與組織中CD56<'+>NK細(xì)胞聚集的相關(guān)性研究 目的：研究子宮內(nèi)膜和蛻膜組織中Mig、IP-10表達(dá)及組織中CD56<'+>NK細(xì)胞的聚集情況，分析組織中Mig、IP-10表達(dá)與CD56<'+>NK細(xì)胞數(shù)量之間的相關(guān)性，探討Mig、IP-10表達(dá)在母胎免疫平衡中的作用。 結(jié)

11、論：子宮內(nèi)膜和蛻膜組織趨化因子Mig、IP-10表達(dá)可能對組織中CD56<'+>NK細(xì)胞聚集起調(diào)控作用；雌、孕激素可能通過刺激組織中Mig、IP-10表達(dá)而影響CD56<'+>NK細(xì)胞的聚集；RU486通過抑制孕激素作用而抑制了組織中Mig、IP-10表達(dá)、進(jìn)一步影響CD56<'+>NK細(xì)胞的聚集。子宮組織中Mig、IP-10表達(dá)變化通過調(diào)控uNK細(xì)胞聚集而影響母胎間免疫平衡。 第三部分雌、孕激素對體外培養(yǎng)的早孕蛻膜基質(zhì)細(xì)胞中趨

12、化因子Mig、IP-10表達(dá)的影響 目的：探討17-β雌二醇和黃體酮對體外培養(yǎng)的早孕蛻膜基質(zhì)細(xì)胞中趨化因子Mig、IP-10表達(dá)的影響，進(jìn)一步了解Mig、IP-10在uNK細(xì)胞聚集和母胎免疫平衡中的作用。 結(jié)論：17-β雌二醇和黃體酮確實可誘導(dǎo)體外培養(yǎng)的早孕蛻膜基質(zhì)細(xì)胞中趨化因子Mig、IP-10表達(dá)；17-β雌二醇和黃體酮對早孕蛻膜基質(zhì)細(xì)胞中趨化因子Mig、IP-10表達(dá)的調(diào)控存在一定程度的藥物濃度特異性和作用時間依賴

13、性。雌、孕激素調(diào)控下早孕蛻膜基質(zhì)細(xì)胞中Mig、IP-10表達(dá)變化可能作為內(nèi)分泌系統(tǒng)調(diào)控免疫系統(tǒng)的中間環(huán)節(jié)而影響母胎間免疫平衡。 本研究創(chuàng)新點 1．首次在人子宮內(nèi)膜和蛻膜組織這個連貫的體系中觀察到趨化因子Mig、IP-10表達(dá) 對CD56L<'+>NK細(xì)胞聚集有調(diào)控作用。 2．首次發(fā)現(xiàn)雌、孕激素對蛻膜基質(zhì)細(xì)胞中Mig、IP-10表達(dá)有調(diào)控作用。 3．首次發(fā)現(xiàn)女性激素通過調(diào)控趨化因子Mig、IP-10表達(dá)