人牙周炎癥組織中干-祖細(xì)胞的體外分離、純化及初步鑒定.pdf

1、牙周組織工程是使牙周組織缺損得到再生性修復(fù)的較理想和具有實(shí)用前景的方法，合理選擇種子細(xì)胞是其獲得成功的關(guān)鍵。目前牙周組織工程的種子細(xì)胞多選用干細(xì)胞，其來源多為健康的人體組織，通常存在取材有創(chuàng)、來源有限等弊端，在一定程度上限制了其應(yīng)用于臨床治療的可行性。
　　現(xiàn)階段，治療中、重度牙周炎最常用、最有效的方法仍是牙周手術(shù)，術(shù)中必不可少的一步就是盡可能地去除所有炎癥肉芽、徹底清創(chuàng)。牙周炎癥組織中，修復(fù)和破壞過程是共同存在并可互相轉(zhuǎn)化的。肉

2、芽組織的轉(zhuǎn)歸除了疤痕，還可能是再生組織，而組織再生離不開間充質(zhì)干細(xì)胞?，F(xiàn)已有實(shí)驗(yàn)分別在增生性齦炎的炎癥牙齦組織和不可逆性牙髓炎患牙的炎癥牙髓組織中發(fā)現(xiàn)了間充質(zhì)干細(xì)胞，提示我們?cè)谘装Y組織應(yīng)該存在干細(xì)胞。另有研究發(fā)現(xiàn)，從牙周炎患牙的肉芽組織中能提取一種可向神經(jīng)細(xì)胞分化的細(xì)胞，這進(jìn)一步提示我們，牙周炎癥肉芽組織中可能存在具多向分化能力的細(xì)胞。而牙周組織破壞發(fā)生后，殘留牙周膜比健康牙周膜中聚集了更多的具有干細(xì)胞特性的細(xì)胞，這些細(xì)胞很可能會(huì)在牙周

3、手術(shù)中與肉芽組織一同被刮除。因此，能否在牙周手術(shù)中就地取材，從牙周炎癥組織中獲得種子細(xì)胞成為我們的關(guān)注點(diǎn)。本研究首次從牙周炎癥組織中分離干細(xì)胞，并對(duì)其可能存在的干細(xì)胞特性進(jìn)行了探討。
　　研究目的：從人牙周炎癥肉芽組織中分離培養(yǎng)出原代細(xì)胞，并對(duì)其生物學(xué)特性和體外誘導(dǎo)分化能力等進(jìn)行初步的生物學(xué)鑒定，期待能為其成為牙周組織工程的種子細(xì)胞提供依據(jù)。
　　研究方法：
　　1、從牙周炎患者拔除的患牙根中1/3或根分叉處粘連肉芽組

4、織取材，采用酶消化組織塊法行細(xì)胞原代培養(yǎng)，經(jīng)有限稀釋法進(jìn)行細(xì)胞純化。同時(shí)分別取材因阻生或正畸需要而拔除的健康第三磨牙或前磨牙牙根中1/3部牙周膜、健康人骨髓，原代培養(yǎng)并純化牙周膜干細(xì)胞和骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞作為對(duì)照。取第4代細(xì)胞進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
　　2、對(duì)三種細(xì)胞用MTT法繪制生長曲線，使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期，將細(xì)胞接種平皿培養(yǎng)10天測(cè)定其克隆形成率，使用免疫熒光染色檢測(cè)波形絲蛋白、CD146和STRO-1的表達(dá)。
　　3、將

5、三種細(xì)胞按一定密度分別均勻接種于24孔板，24h后分別換為成骨誘導(dǎo)液和成脂誘導(dǎo)液，常規(guī)換液，培養(yǎng)30d。分別行茜素紅和油紅O染色，觀察礦化結(jié)節(jié)和脂滴形成情況。
　　研究結(jié)果：
　　1、從人牙周炎癥組織中分離的原代細(xì)胞貼壁生長，經(jīng)純化后細(xì)胞體積略小，多呈短梭形，形態(tài)上與健康人牙周膜干細(xì)胞和骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞相比無明顯差異。
　　2、牙周炎癥組織來源細(xì)胞的生長曲線呈倒“S”形，生長速度、細(xì)胞周期分析S期細(xì)胞百分比和克隆形成率

6、低于健康牙周膜干細(xì)胞，高于骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞；波形絲蛋白、CD146和STRO-1均有陽性表達(dá)。
　　3、牙周炎癥組織來源細(xì)胞經(jīng)成骨誘導(dǎo)和成脂誘導(dǎo)后，分別有礦化結(jié)節(jié)和脂滴形成，其成骨和成脂能力與健康牙周膜干細(xì)胞相當(dāng)，明顯低于骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞。
　　結(jié)論：該實(shí)驗(yàn)初步證實(shí)了人牙周炎癥組織中存在有干/祖細(xì)胞，具有間充質(zhì)干細(xì)胞的一般特點(diǎn)，但與正常牙周膜干細(xì)胞和骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞又存在異質(zhì)性。但其細(xì)胞類型是否為牙周膜干細(xì)胞，是否具有較強(qiáng)的