小鼠PGCs的分離鑒定及體外培養(yǎng)初步研究.pdf

1、學校代碼：10126分類號：——學號：三12Q墨Q笪編號：——小鼠PGCs的分離鑒定及體外培養(yǎng)初步研究ISOLATION，IDENTIFICATIONANDIN玎豫DCUL，rUREoFMoUSEPRIMoRDIALGERMCELLS學院：生命科學學院專業(yè)：動物學研究方向：生殖生物學與生物技術姓名：魏玲海指導教師：于海泉研究員2015年5月28日內(nèi)蒙古大學碩士學位論文小鼠PGCs的分離鑒定及體外培養(yǎng)初步研究摘要原始生殖細胞(Primor

2、dialgermcells，PGCs)是哺乳動物生殖細胞的前體細胞，是在胚胎發(fā)育早期具有多能性和獨特遷移活性的細胞，近年來己成為研究細胞命運決定、細胞遷移和表觀遺傳重編程調(diào)節(jié)機制的重要模型。但由于PGCs細胞數(shù)量有限、分離純化難度大，這也使得相關研究還有待深化。本研究對小鼠PGCs細胞進行了初步的分離、鑒定和體外培養(yǎng)。本研究選取105dpc和135dpc的小鼠胎兒，分別利用機械法和酶消化法獲得分散的混合細胞，對細胞進行特異性SSEA1抗

3、體標記后，使用流式細胞儀分選PGCs，并對分選獲得的細胞進行了堿性磷酸酶(alkalinephosphatase，AKP)染色和多能性標記分子OCT4免疫熒光染色鑒定，最后通過RTPCR技術檢測了PGCs特異性基因的表達。結(jié)果顯示，分選所得細胞堿性磷酸酶陽性率為8680％，免疫熒光染色表明所分選細胞呈SSEA一1和OCT4為陽性。RTPCR技術檢測結(jié)果顯示分選細胞表達PrdmI、Lhcgr、Dppa3、Nr6al等PGCs特異性標記基因