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1、學(xué)校代碼:10126分類(lèi)號(hào):——學(xué)號(hào):三12Q墨Q笪編號(hào):——小鼠PGCs的分離鑒定及體外培養(yǎng)初步研究ISOLATION,IDENTIFICATIONANDIN玎豫DCUL,rUREoFMoUSEPRIMoRDIALGERMCELLS學(xué)院:生命科學(xué)學(xué)院專(zhuān)業(yè):動(dòng)物學(xué)研究方向:生殖生物學(xué)與生物技術(shù)姓名:魏玲海指導(dǎo)教師:于海泉研究員2015年5月28日內(nèi)蒙古大學(xué)碩士學(xué)位論文小鼠PGCs的分離鑒定及體外培養(yǎng)初步研究摘要原始生殖細(xì)胞(Primor
2、dialgermcells,PGCs)是哺乳動(dòng)物生殖細(xì)胞的前體細(xì)胞,是在胚胎發(fā)育早期具有多能性和獨(dú)特遷移活性的細(xì)胞,近年來(lái)己成為研究細(xì)胞命運(yùn)決定、細(xì)胞遷移和表觀遺傳重編程調(diào)節(jié)機(jī)制的重要模型。但由于PGCs細(xì)胞數(shù)量有限、分離純化難度大,這也使得相關(guān)研究還有待深化。本研究對(duì)小鼠PGCs細(xì)胞進(jìn)行了初步的分離、鑒定和體外培養(yǎng)。本研究選取105dpc和135dpc的小鼠胎兒,分別利用機(jī)械法和酶消化法獲得分散的混合細(xì)胞,對(duì)細(xì)胞進(jìn)行特異性SSEA1抗
3、體標(biāo)記后,使用流式細(xì)胞儀分選PGCs,并對(duì)分選獲得的細(xì)胞進(jìn)行了堿性磷酸酶(alkalinephosphatase,AKP)染色和多能性標(biāo)記分子OCT4免疫熒光染色鑒定,最后通過(guò)RTPCR技術(shù)檢測(cè)了PGCs特異性基因的表達(dá)。結(jié)果顯示,分選所得細(xì)胞堿性磷酸酶陽(yáng)性率為8680%,免疫熒光染色表明所分選細(xì)胞呈SSEA一1和OCT4為陽(yáng)性。RTPCR技術(shù)檢測(cè)結(jié)果顯示分選細(xì)胞表達(dá)PrdmI、Lhcgr、Dppa3、Nr6al等PGCs特異性標(biāo)記基因
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