縫隙連接參與缺血后處理和Heptanol處理的心肌保護作用.pdf

1、缺血后處理的概念是2003年zhao等首次提出的,它是指在心肌長時間缺血后,于復(fù)灌初期立即給予心肌反復(fù)多次短暫的復(fù)灌/停灌,具有明顯的對抗心臟缺血/復(fù)灌損傷的保護作用.但缺血后處理的心肌保護作用機制尚未完全清楚.近幾年來的研究表明,縫隙連接(gapiunction)通訊參與缺血復(fù)灌心肌的保護作用.縫隙連接是存在于相鄰細胞間的膜通道結(jié)構(gòu),由相鄰的兩個細胞質(zhì)膜上的連接子相互銜接而成,縫隙連接對心肌細胞電同步興奮和代謝耦聯(lián)起著重要作用,同時縫

2、隙連接通訊也受到一些藥物的影響,如H印tanolo Heptanol是一種脂溶性的縫隙連接脫耦聯(lián)劑,能可逆地抑制縫隙連接.我們前期的研究發(fā)現(xiàn),Heptanol可以發(fā)揮類似心肌缺血預(yù)處理的效應(yīng).據(jù)報道,缺血后處理與缺血預(yù)處理存在一些共同的保護機制.我們假設(shè),縫隙連接可能也參與缺血后處理的心肌保護作用.本實驗旨在探討缺血后處理和Heptanol處理在心肌缺血復(fù)灌損傷中的作用,以及縫隙連接是否參與缺血后處理的心肌保護作用. 目的:

3、 1.在大鼠離體心臟和整體心臟缺血/復(fù)灌模型上,觀察缺血后處理和Heptanol處理的心肌作用; 2.觀察縫隙連接在缺血后處理和Heptanol處理心肌保護作用中的地位和作用. 方法: 1.在體大鼠缺血/復(fù)灌模型和缺血后處理的方法大鼠麻醉固定,暴露心臟后,絲線結(jié)扎冠狀動脈左前降支30 min,恢復(fù)灌流120 min作為缺血/復(fù)灌過程,在停灌后復(fù)灌即刻立即給予3次復(fù)灌/停灌循環(huán),每次各10 s,共計1min行缺

4、血后處理.2.離體局部缺血/復(fù)灌模型和缺血后處理的方法離體灌流心臟結(jié)扎左冠狀動脈前降支30 min,恢復(fù)灌流120 min作為缺血/復(fù)灌過程,在停灌后復(fù)灌即刻立即給予3次復(fù)灌/停灌循環(huán),每次各10 s,共計1min行缺血后處理.3.離體全心停灌/復(fù)灌模型和缺血后處理的方法離體灌流心臟全心停灌30min復(fù)灌120min,在停灌后復(fù)灌即刻立即給予6次全心復(fù)灌/停灌循環(huán),每次各10 s,共計2 min行缺血后處理.4.左室功能評價連續(xù)記錄復(fù)灌

5、過程中左心室發(fā)展壓(1eft ventricular developed pressure,LNDP)、心率(heart rate,HR)、心率與發(fā)展壓的乘積(rate-pressure product,RIP)、左心室內(nèi)壓最大上升和下降速率(maximal rise/fall rate of left ventricular pressure,±dP/dt<,max>)等各項動力學(xué)指標(biāo),測定復(fù)灌各時間點單位時間的冠脈流量.5.灌流心臟

6、流出液乳酸脫氫酶的測定在復(fù)灌5min、10min、20min收集冠脈流出液,用分光光度法測定乳酸脫氫酶(lactatedehydrogenase,LDH)的含量.6.心律失常評分法用心律失常評分法對心律失常嚴(yán)重程度進行定量分析.7.心肌梗死面積測定采用TTC染色法測定梗死面積,掃描儀掃描后使用Image J軟件計算梗死區(qū)面積占危險區(qū)面積的比例.8.心肌傳導(dǎo)速度測定采用四電極法測定心肌傳導(dǎo)速度,即將傳導(dǎo)距離除以兩對記錄電極所記錄到心外膜電

7、圖的起始點的時間差. 結(jié)果: 1.缺血后處理對缺血/復(fù)灌心肌的影響 (1)在離體心臟灌流中,與I/R組相比,缺血后處理組LVDP、RPP明顯增高、±dP/dt<,ma>增大、冠脈流量增多;復(fù)灌期間冠脈流出液中LDH含量降低、心肌梗死面積減小,復(fù)灌期間心律失常評分下降,復(fù)灌時心肌傳導(dǎo)速度降低. (2)在整體大鼠心肌缺血/復(fù)灌中,缺血后處理組的心肌梗死面積明顯減小,復(fù)灌期間心律失常評分下降. 2.He

8、ptanol處理對缺血/復(fù)灌心肌的影響 (1) Heptanol預(yù)處理對缺血/復(fù)灌心肌的影響在離體心臟灌流中,各濃度Heptanol均使心肌梗死范圍縮小,并呈劑量依從性;高濃度Heptanol在心肌缺血過程及其后120 min的復(fù)灌過程中心律失常評分下降. 在整體大鼠心臟,Heptanol可使心肌缺血過程及其后120 min的再灌注過程中心律失常評分下降,中高劑量Heptanol均使心肌梗死面積縮小. (2) H

9、eptanol后處理對缺血/復(fù)灌心肌的影響在離體心臟灌流中,各濃度Heptanol使心肌復(fù)灌過程中心律失常評分下降,高濃度Heptanol使心肌梗死范圍縮小,并呈劑量依從性;中高濃度Heptanol降低心肌復(fù)灌的LDH含量,0.5、1 mmol/L Heptanol降低心肌復(fù)灌時的傳導(dǎo)速度,0.1 mmol/L Heptanol降低心肌復(fù)灌早期的傳導(dǎo)速度. 在整體大鼠心臟,各劑量Heptanol均使心肌梗死面積縮小,中高劑量He

10、ptanol降低復(fù)灌時心律失常評分. 3.AAP10對Heptanol和缺血后處理心臟作用的影響 (1) AAP10對心肌傳導(dǎo)速度的影響1×10<'-6>、1×10<'-7>、1×10<'-8>mol/L的AAP10均增加離體心臟心肌的傳導(dǎo)速度,并呈劑量依從性. (2) AAP10對缺血/復(fù)灌心肌的作用與I/R組相比,AAP10+I/R組的RPP、LVDP、±dP/dt<,ma>和冠脈流量、LDH含量、心肌梗死面

11、積無明顯變化,但明顯降低了復(fù)灌期各時間點的心律失常評分,增加復(fù)灌30min前的心肌傳導(dǎo)速度. (3) AAP10減弱缺血后處理的心肌保護作用于復(fù)灌初期同時給予AAP10取消了缺血后處理增高復(fù)灌期RPP、INDP、±dP/dt<,max>的作用,取消了缺血后處理增加冠脈流量和降低冠脈流出液中IDH釋放的作用,也取消了缺血后處理縮小心肌梗死范圍和降低心律失常評分的作用,復(fù)灌時心肌傳導(dǎo)速度比缺血后處理組加快. (4) AAP1