TLR4，TLR9 mRNA在P0 180-199誘導(dǎo)EAN模型中的動(dòng)態(tài)表達(dá)及TWP對(duì)其的影響.pdf

1、目的：格林-巴利綜合征(Guillain Barre Syndrome，GBS)是一種常見周圍神經(jīng)系統(tǒng)自身免疫性疾病，其病理改變主要表現(xiàn)為周圍神經(jīng)的髓鞘脫失和炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，其病因和發(fā)病機(jī)制尚不十分清楚。實(shí)驗(yàn)性變態(tài)反應(yīng)性神經(jīng)炎(EAN)是研究GBS的理想動(dòng)物模型，是由CD4<'+>T細(xì)胞介導(dǎo)的急性多發(fā)性炎癥性神經(jīng)根脫髓鞘性疾病，Th1細(xì)胞與Th2細(xì)胞的功能失衡是其發(fā)病的關(guān)鍵。TLR是一類新近發(fā)現(xiàn)的天然免疫模式識(shí)別受體，其可通過(guò)病原相關(guān)分子

2、模式(PAMP，Pathogenassocated molecular paterns)識(shí)別抗原，激活抗原呈遞細(xì)胞(APC)，產(chǎn)生共刺激信號(hào)而促使T細(xì)胞活化。雷公藤多甙(TWP)是一種中草藥提取物，具有較強(qiáng)的免疫抑制作用，臨床應(yīng)用于許多自身免疫性疾病，取得一定的療效。本實(shí)驗(yàn)觀察了TLR4，TLR9在EAN大鼠的坐骨神經(jīng)，脾臟，外周血，淋巴結(jié)的動(dòng)態(tài)表達(dá)，以及雷公藤多甙對(duì)其的影響。探討TLR與EAN的發(fā)病關(guān)系，為臨床尋找新的治療自身免疫性疾

3、病的策略奠定理論基礎(chǔ)。 方法：68只Lewis大鼠，清潔級(jí)，雄性，6-8周，體重160-180克，隨機(jī)分為抗原注射組EAN組(n=4，4，4，4)；雷公藤多甙干預(yù)組EAN+TWP組(n=4，4，4，4)：生理鹽水干預(yù)對(duì)照組EAN+NS(n=4，4，4，4)；完全弗氏佐劑組CFA組(n=4，4，4，4)，生理鹽水對(duì)照組NS組(n=4)。EAN組， EAN+TWP組， EAN+NS組大鼠用周圍神經(jīng)髓鞘蛋白P0180-199+CFA+

4、NS(200μl)免疫，EAN+TWP組從大鼠出現(xiàn)癥狀開始給予雷公藤多甙灌胃(40mg/kg.d)干預(yù)治療，觀察免疫后大鼠的發(fā)病情況和組織病理學(xué)改變及TwP對(duì)其的影響。分別在第7天，第16天，第24天，第33天處死動(dòng)物，取坐骨神經(jīng)根，脾臟，外周血和淋巴結(jié)，制作病理切片行HE染色和固蘭染色觀察其病理改變，利用RT-PCR檢測(cè)TLR4，TLR9的mRNA表達(dá)水平。結(jié)果：EAN大鼠在發(fā)病17天時(shí)癥狀達(dá)高峰，第33天時(shí)好轉(zhuǎn)，TLR4 mRNA在

5、第16天時(shí)表達(dá)最高，后逐漸下降，前后時(shí)間點(diǎn)相比均有差異(p<0.05)，與對(duì)照組相比有顯著的差異性；TLR9 mRNA整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中一直呈上升趨勢(shì)，前后各時(shí)間點(diǎn)相比均有差異(P<0.05)，與對(duì)照組相比有顯著差異。EAN+TWP組大鼠治療后其癥狀與EAN+NS組相比稍微改善，坐骨神經(jīng)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)減少，EAN+TWP組的TLR9和TLR4的表達(dá)在第16天，第24天，第33天均低于EAN+NS組，有顯著性差異。CFA組和NS組大鼠無(wú)癥狀。C