巴比二氏綜合癥家系致病基因的篩選、定位及測(cè)序.pdf

1、目的：對(duì)中國(guó)漢族2個(gè)巴比二氏綜合癥(Bardet-Biedl Syndrome，BBS)遺傳性疾病家系進(jìn)行遺傳連鎖分析及基因測(cè)序，篩選鑒定新致病基因位點(diǎn)和/或新致病基因及鑒定已知基因的新突變，以確認(rèn)致病基因并闡明致病機(jī)理。 方法： 1.采集中國(guó)漢族2個(gè)巴比二氏綜合癥遺傳性疾病家系的臨床資料和血樣標(biāo)本，提取血樣標(biāo)本中DNA，建立病人的臨床信息數(shù)據(jù)庫(kù)。 2.針對(duì)巴比二氏綜合癥遺傳性疾病的己知基因，設(shè)計(jì)引物進(jìn)行測(cè)序，排

2、除或定位于已知基因。應(yīng)用遺傳連鎖方法，選擇己知位點(diǎn)及已知基因物理位置附近的STR(short tandom repeat markers)標(biāo)記物進(jìn)行已知基因及已知位點(diǎn)的篩查。 3.對(duì)是已知位點(diǎn)和基因的家系的陽(yáng)性位點(diǎn)附近有連鎖的，在其附近進(jìn)行進(jìn)一步的遺傳間距更近的遺傳連鎖分析；對(duì)排除己知位點(diǎn)及基因的家系，用382個(gè)STR標(biāo)記物(ABI PRISMLinkage Mapping Sets V2.5-MD)，PCR擴(kuò)增其片段，采用AB

3、I3100遺傳分析儀進(jìn)行全基因組的掃描。 4.用國(guó)際公認(rèn)的遺傳連鎖分析方法，根據(jù)等位基因(單倍體)分型結(jié)果，應(yīng)用兩點(diǎn)法，分別計(jì)算STR標(biāo)記物的LOD值(Lod Score值，表明疾病基因與該位點(diǎn)連鎖的緊密性大小)，以最大LOD值確定陽(yáng)性位點(diǎn)。 5.在陽(yáng)性位點(diǎn)附近，根據(jù)熒光標(biāo)記的STR(single nucleotide polymophism)基因型檢測(cè)結(jié)果，進(jìn)行更精細(xì)定位，確定疾病基因的最小遺傳間距MGI(Minimu

4、m GeneticInterval)。在MGI內(nèi)，通過(guò)候選基因法篩選其致病基因及突變。 結(jié)果： 1.建立了中國(guó)漢族巴比二氏綜合癥遺傳性疾病家系的臨床及臨床信息數(shù)據(jù)庫(kù)。 2.完成了對(duì)1個(gè)巴比二氏綜合癥(Bardet-BiedlSyndrome，BBS)疾病家系是已知基因BBS7的連鎖定位和測(cè)序，發(fā)現(xiàn)其是已知基因的新突變，為BBS致病機(jī)制的進(jìn)一步闡明提供了依據(jù)。 3.完成對(duì)1個(gè)BBS遺傳性疾病家系是已知基因B