表皮生長(zhǎng)因子對(duì)結(jié)合上皮細(xì)胞損傷修復(fù)的影響.pdf

1、目的： 改良和優(yōu)化人結(jié)合上皮(junctionalepithelium，JE)體外培養(yǎng)和保存條件；檢測(cè)JE細(xì)胞對(duì)表皮生長(zhǎng)因子(epidermalgrowthfactor,EGF)的反應(yīng)性和表皮生長(zhǎng)因子受體(epidermalgrowthfactorreceptor,EGFR)在其中的表達(dá)；比較EGF對(duì)JE與牙齦上皮(gingivalepithelium，GE)體外損傷修復(fù)的影響，全面揭示EGF在JE細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖和損傷愈合中的調(diào)

2、節(jié)作用，為牙周病的再生治療提供新的理論依據(jù)。 方法： 選擇因正畸拔除的健康前磨牙，緊貼牙面刮下JE組織，簡(jiǎn)化操作步驟，按設(shè)定的降溫程序凍存細(xì)胞，進(jìn)一步研究JE細(xì)胞的生物學(xué)特性。MTT法檢測(cè)EGF對(duì)JE細(xì)胞增殖的影響。采用RT-PCR和免疫細(xì)胞化學(xué)方法分別檢測(cè)EGFRmRNA和蛋白的表達(dá)，同法以GE細(xì)胞作為對(duì)照。制作JE和GE細(xì)胞爬片，待生長(zhǎng)融合至單層，于玻片中央作寬為3mm的損傷區(qū)，然后孵育在不同EGF濃度(0、0.1、

3、1、5、10、20ng/ml)的條件培養(yǎng)液中。選擇其中一個(gè)濃度，在該濃度下孵育5、9、12天，取出玻片分別作HE和增殖細(xì)胞核抗原(proliferatingcellnuclearantigen，PCNA)染色，計(jì)算細(xì)胞修復(fù)率和PCNA陽性率，比較JE和GE兩者的損傷反應(yīng)特征。 結(jié)果： (1)不用Dispase冷消化，采用0.1％胰蛋白酶消化，同樣可成功地培養(yǎng)出JE細(xì)胞，且復(fù)蘇后的存活率為(93.87±3.11)％，生長(zhǎng)良

4、好，與第2代細(xì)胞相似；JE細(xì)胞CK19表達(dá)為強(qiáng)陽性，而波形絲蛋白(Vimentin)為陽性。 (2)EGF(5-20ng/ml)可以明顯促進(jìn)JE細(xì)胞增殖，與空白對(duì)照組間有顯著性差異(P＜0.05)，且在5ng/ml時(shí)增殖效應(yīng)最大；JE細(xì)胞表達(dá)EGFRmRNA，與GE之比為1:1.2，而EGFR蛋白在兩者均為陽性。 (3)在第9天，EGF(5-20ng/ml)可明顯促進(jìn)GE和JE體外損傷后的細(xì)胞增殖，且與陰性對(duì)照組之間有顯

5、著性差異(P＜0.05)，但JE和GE的增殖反應(yīng)無明顯區(qū)別(P＞0.05)；另外，JE和GE對(duì)EGF的損傷修復(fù)反應(yīng)呈濃度相關(guān)性，選擇20ng/ml作為工作濃度發(fā)現(xiàn)，在第9和12天，GE的修復(fù)速度明顯快于JE，兩者有顯著性差異(P＜0.05)。 結(jié)論： (1)改良的JE分離培養(yǎng)與凍存方法可行，JE表型在體內(nèi)和體外并非完全一致，可能與細(xì)胞生長(zhǎng)的底物有關(guān)； (2)JE中存在EGFR，推測(cè)EGF可能通過與EGFR相結(jié)合在