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1、超氧化物歧化酶(SOD)是一種金屬酶。根據(jù)其活性位點結(jié)合的金屬離子不同,SOD可分為CuZn-SOD、Fe-SOD和Mn-SOD以及最近發(fā)現(xiàn)的Ni-SOD和FeZn-SOD。由于SOD可以使超氧陰離子自由基歧化生成過氧化氫和分子氧,從而在防止氧化脅迫方面發(fā)揮重要作用。 蠟質(zhì)芽孢桿菌M22菌株(M22)是本實驗室從植物體內(nèi)分離的對多種植物病害有良好防治效果的生防細菌。前期研究發(fā)現(xiàn)其代謝液及胞內(nèi)SOD含量較高,推測SOD可能在M22
2、定殖過程中以及在病害防治中發(fā)揮重要作用。 根據(jù)已克隆的M22菌株Mn14-SOD的基因序列,設(shè)計特異引物,擴增Mn14-sod基因的編碼框序列。將擴增產(chǎn)物插入到酵母分泌表達載體pPICZαA中,構(gòu)建重組質(zhì)粒pPICZαA-sodMn14,然后電激轉(zhuǎn)化酵母細胞。經(jīng)ZeocinTM抗性篩選、PCR鑒定得到含Mn14-sod基因的陽性轉(zhuǎn)化子;當用PAGE電泳檢測它們的表達產(chǎn)物時,其中只有3株重組菌株P(guān)MSA、PMSB和PMSC的發(fā)酵上
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