惡性腫瘤新標志物的發(fā)現(xiàn)及靶點藥物研究.pdf

1、惡性腫瘤是目前威脅人類健康的三大”殺手”之一。因其生長迅速，造成組織器官的嚴重破壞，并且容易轉移，給人類的健康帶來很大的危害。因此，對惡性腫瘤來說，“早發(fā)現(xiàn)、早診斷、早治療和有效治療”具有極其重要的意義。本論文第一部分主要探討ERGIC—53在白血病患者與正常人、CML患者不同臨床階段的表達水平差異，并在幾個耐藥細胞株及其敏感株中檢測其表達差異，預期ERGIC—53成為白血病早期診斷和判斷其所處臨床階段的新指標；整合素αvβ3表達于多種

2、惡性腫瘤細胞表面，但它不表達于正常的內皮細胞，因此，它是一個很好的藥物治療靶點。本論文本第二部分對其新的小分子抑制劑IH1062(3，5—二氯苯基雙胍)進行研究，探討它在體內外對整合素αvβ3陽性的惡性腫瘤細胞誘導失巢凋亡和抑制轉移的作用及機制。 1 ERGIC—53在白血病中的表達 我們通過PCR檢測K562/A02與K562、K562/G01與K562、MCF—7/ADR與MCF—7、HL60/ADR與HL60四對細

3、胞中的ERGIC—53表達水平，發(fā)現(xiàn)耐藥株K562/A02、K562/G01和MCF—7/ADR的ERGIC—53 mRNA表達水平比其對應的敏感株高，分別是其敏感株的1.56倍、1.58倍和1.80倍(p<0.05)，而HL60/ADR與HL60對比并無此差異。這四對細胞株的共同點和區(qū)別就是：PgP參與了K562/A02、K562/G01和MCF—7/ADR三個耐藥株的耐藥的形成，具有藥物外排“泵”功能，但是并不參與HL60/ADR耐

4、藥的形成。因此我們推測ERGIC—53與PgP的轉運相關；104例白血病患者的骨髓和11位正常志愿者的外周血提取單個核細胞后進行實時定量PCR，白血病患者的ERGIC—53 mRNA平均表達水平是正常人的142.91±15.42倍(p<0.05)；在CML病人中，ERGIC—53 mRNA表達水平與其所處的臨床階段密切相關：急變期/加速期(314.28±34.73)高于慢性期(66.66±6.43)，慢性期高于緩解期(15.23±1.1

5、0)，p<0.05。因此，ERGIC—53表達水平的監(jiān)測具有重要的臨床意義，它可能會被用作白血病早期診斷，或用作輔助判斷CML臨床階段的新指標。 2 IH1062誘導惡性腫瘤細胞失巢凋亡和抑制腫瘤轉移的研究。 我實驗室基于整合素αvβ3的晶體結構通過計算機虛擬篩選和粘附抑制實驗，篩選出整合素αvβ3新的抑制劑IH1062，本研究對其進行更深一步的研究。主要目的是探討IH1062對整合素αvβ3高表達的惡性腫瘤的作用及機制

6、。IH1062在體外能夠通過影響FAK的磷酸化誘導黑色素瘤細胞M21的失巢凋亡，此過程中有caspase級聯(lián)的活化以及凋亡相關蛋白Survivin升高和Bcl—2/Bax比值升高。我們通過裸鼠尾靜脈接種M21細胞的方法成功的建立黑色素瘤裸鼠肺轉移模型，通過肺表面癌結節(jié)的情況評價肺轉移的程度。結果顯示，尾靜脈接種1×106組，2×106組和5×106組M21細胞均能100％形成肺轉移。1×106組，2×106組和5×106組平均每只裸鼠肺

7、表面癌結節(jié)：83.92±8.04，70.43±6.13，88.35±12.02，三組之間沒有明顯差異，對照組沒有癌結節(jié)出現(xiàn)。因此，用1×106個M21細胞尾靜脈接種裸鼠即可建立M21的裸鼠肺轉移模型，100％形成肺轉移灶。我們應用此動物模型進行IH1062的初步體內藥效學研究，結果顯示陰性對照組(接種M21，不加藥)、0.6 mg/kg組、1.2 mg/kg組和2.4 mg/kg組的癌結節(jié)數(shù)目均值分別為138.67±26.35、53.0

8、0±4.58、34.00±4.04和4.67±2.01。差別具有統(tǒng)計學意義。病理學分析可見，陰性對照組鏡下多見大片腫瘤灶，甚至整個肺尖部布滿腫瘤細胞；0.6 mg/kg組多見灶性轉移灶，可見血管周圍大量腫瘤細胞浸潤；1.2 mg/kg組和2.4 mg/kg組多見灶性和小灶性腫瘤灶，有的腫瘤灶僅有幾個腫瘤細胞組成，未見大片腫瘤灶?？傊?，靶向整合素αvβ3的小分子藥物IH1062在體內外顯示出誘導惡性腫瘤細胞失巢凋亡和抑制轉移的作用，是一個