鼠肺成纖維細(xì)胞在細(xì)胞外基質(zhì)支架中生長(zhǎng)特性的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：建立一套可靠的鼠肺成纖維細(xì)胞分離、純化和培養(yǎng)技術(shù)，并研究鼠肺成纖維細(xì)胞在細(xì)胞外基質(zhì)支架中的生長(zhǎng)特性，進(jìn)而為體外研究間質(zhì)性肺病的發(fā)病機(jī)制及治療提供一種新的方法。 方法： 1、采用胰酶消化出生后2dSD大鼠肺組織塊，經(jīng)差時(shí)貼壁法，分離、純化鼠肺成纖維細(xì)胞，并進(jìn)行原代培養(yǎng)。用波形蛋白免疫熒光染色、掃描電鏡和蛋白質(zhì)印跡法對(duì)所分離、純化的細(xì)胞進(jìn)行鑒定，并繪制其生長(zhǎng)曲線。 2、將纖維蛋白原、層粘連蛋白和纖粘連蛋白按一定

2、比例混合后，在新鮮大鼠血漿促凝作用下，構(gòu)建單層毯狀細(xì)胞外基質(zhì)支架。將原代培養(yǎng)并純化傳代的鼠肺成纖維細(xì)胞分別植入支架及加入轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子—β1的支架，應(yīng)用倒置顯微鏡、免疫熒光、掃描電鏡、MTT法、Real—timePCR和免疫印跡方法觀察鼠肺成纖維細(xì)胞在三維培養(yǎng)中的生長(zhǎng)特性。 結(jié)果： 1、該方法所得細(xì)胞產(chǎn)量大、純度高。鼠肺成纖維細(xì)胞免疫熒光染色波形蛋白陽(yáng)性。掃描電鏡觀察可見(jiàn)細(xì)胞有微絨毛，細(xì)胞間連接成網(wǎng)狀。免疫印跡檢測(cè)顯示波形