LRIG3基因?qū)δX膠質(zhì)瘤細(xì)胞生物學(xué)行為差異性調(diào)控的機(jī)制研究.pdf

1、華中科技大學(xué)博士學(xué)位論文LRIG3基因?qū)δX膠質(zhì)瘤細(xì)胞生物學(xué)行為差異性調(diào)控的機(jī)制研究姓名：蔡明俊申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：外科學(xué)（神經(jīng)外科）指導(dǎo)教師：雷霆20090501華 中 科 技 大 學(xué) 博 士 學(xué) 位 論 文華 中 科 技 大 學(xué) 博 士 學(xué) 位 論 文 4 第二部分 LRIG3 基因沉默對(duì)神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞 GL15 細(xì)胞系增殖及細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡的影響及其機(jī)制 目的 目的 探討 RNA 干擾沉默 LRIG3 基因表達(dá)對(duì)神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞

2、系 GL15 增殖及增殖細(xì)胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen, PCNA)和 Ki-67 表達(dá)，以及對(duì)細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡的影響及其作用機(jī)制。 方法 方法 用攜帶 U6 啟動(dòng)子和 LRIG3 特異性短發(fā)夾 RNA(short hairpin RNA, shRNA)序列的質(zhì)粒載體 pGenesil2-LRIG3-shRNA1、pGenesil2-LRIG3-shRNA2 及含非特異性shRNA 編

3、碼序列的對(duì)照質(zhì)粒 pGenesil2-negative shRNA (neg) 轉(zhuǎn)染膠質(zhì)瘤細(xì)胞系GL15，G418 篩選出穩(wěn)定株，逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）和 Western blot 法檢測(cè)LRIG3 表達(dá)的改變， 應(yīng)用免疫組化 SABC 法檢測(cè)對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組 GL15 細(xì)胞中 PCNA和 Ki-67 的表達(dá)；應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測(cè)各組細(xì)胞的細(xì)胞周期變化，Annexin V-FITC/PI雙標(biāo)記分析細(xì)胞凋亡。 結(jié)果 結(jié)果 shRN

4、A1 及 shRNA2 組細(xì)胞 LRIG3 mRNA 水平與對(duì)照組相比分別下降了52.4%和 63.8%，LRIG3 蛋白水平分別下降了 50.9%和 67.4%。對(duì)照組細(xì)胞 PCNA 陽(yáng)性率為(35.40±5.69)%， shRNA1 及 shRNA2 組細(xì)胞 PCNA 陽(yáng)性率分別為(72.13±5.64)%和(81.93±5.23)%，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P <0.01)。Ki-67 陽(yáng)性率在對(duì)照

5、組細(xì)胞為(49.73±5.73)%，shRNA1 及 shRNA2 組細(xì)胞分別為(82.27±5.50)%和(88.67±3.52)%，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P <0.01)。Ki-67 表達(dá)與 PCNA 表達(dá)呈正相關(guān)(r= 0.932, P < 0.001)。流式細(xì)胞儀分析顯示，實(shí)驗(yàn)組的 G2/M 期細(xì)胞細(xì)胞百分率比對(duì)照組明顯增加，細(xì)胞增殖指數(shù)顯著增加 （p<0.01） ； LRIG3 基