產(chǎn)前篩查及多重實(shí)時(shí)熒光定量PCR快速分子診斷非整倍體技術(shù)的建立.pdf

1、一、目的：
　　 1.探討國(guó)外唐氏篩查軟件在中國(guó)人群應(yīng)用的可行性。
　　 2.應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)（Real-time quantitative polymerasechain reaction，RT-qPCR）技術(shù)，建立多重實(shí)時(shí)熒光定量PCR快速診斷唐氏及愛(ài)德華綜合征技術(shù)。
　　 二、方法：應(yīng)用時(shí)間分辨熒光免疫法檢測(cè)孕早期（11～13+6周）1517例孕婦血清的妊娠相關(guān)血漿蛋白-A（Pregnancy-

2、associated plasma protein，PAPP-A）、人絨毛膜促性腺激素（Beta-human chorionic gonadotropin，），孕中期（14～20周）。4858例孕婦血清的hCG及甲胎蛋白（Alpha-fetoprotein，AFP），超聲測(cè)量孕早期胎兒頸部半透明厚度（Nuchal translucency，NT），然后將孕早期檢測(cè)數(shù)據(jù)輸入英國(guó)胎兒醫(yī)學(xué)基金會(huì)（FMF）提供的The First Trimes

3、terScreeningProgram,version2.2軟件進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估，將孕中期檢測(cè)數(shù)據(jù)輸入PerkinElmer公司提供的LifeCycle軟件進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估。
　　 采用多重實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)，設(shè)計(jì)21、18號(hào)染色體上的APP及TYMS基因相應(yīng)的引物和探針在同一管中作為相互內(nèi)參照基因同時(shí)擴(kuò)增，對(duì)36例外周血的正常核型樣本（A組）、16例羊水的正常核型樣本（B組）、21例唐氏綜合征（C 組）及6例愛(ài)德華綜合征樣本（D組

4、）進(jìn)行檢測(cè)，對(duì)4組樣本△CT值進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，建立正常核型樣本△CT值的參考范圍，再利用已建立的方法對(duì)182例臨床未知樣本進(jìn)行檢測(cè)。
　　 三、結(jié)果：
　　 1.孕早期唐氏篩查1517例孕婦中，高風(fēng)險(xiǎn)孕婦40例，檢出1例唐氏綜合征，隨訪未發(fā)現(xiàn)漏診，假陽(yáng)性率為2.6％，檢出率為100％；孕中期唐氏篩查4858例孕婦中，高風(fēng)險(xiǎn)孕婦209例，檢出3例唐氏綜合征和2例愛(ài)德華綜合征，隨訪發(fā)現(xiàn)漏診2例唐氏綜合征，假陽(yáng)性率為4.2％，

5、檢出率為71.4％。
　　 2.1517例孕早期唐氏篩查與4858例孕中期唐氏篩查的假陽(yáng)性率比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），因樣本量較小，未對(duì)檢出率作統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
　　 3.A，B，C，D 四組樣本△CT均值分別為-0.48±0.15，-0.49±0.12，-1.26±0.17和0.25±0.12。獨(dú)立樣本t 檢驗(yàn)：B組與A組間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；C組與A組、D組與A組間有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）,且無(wú)交叉

6、重疊。多重實(shí)時(shí)熒光定量PCR能有效區(qū)分唐氏、愛(ài)德華綜合征和正常核型樣本，與染色體核型分析結(jié)果高度一致。
　　 4.建立了本實(shí)驗(yàn)室正常核型樣本的△CT值參考范圍：-0.93～-0.03（Mean±3SD），檢測(cè)182例臨床樣本提示該技術(shù)的靈敏度為100％，特異性為98.3％。
　　 四、結(jié)論：
　　 1.引進(jìn)國(guó)外唐氏篩查軟件對(duì)中國(guó)人種孕婦開(kāi)展產(chǎn)前篩查，對(duì)預(yù)防唐氏及愛(ài)德華綜合征患兒的出生有重大意義。
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