胰腺癌蛋白表達(dá)譜的生物信息學(xué)分析及C14orf166促進(jìn)胰腺癌侵襲轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制研究.pdf

1、胰腺癌是一高度惡性腫瘤,以起病隱匿、惡性程度高、手術(shù)切除率低及預(yù)后極差為特征,其5年的生存率低于5％。絕大多數(shù)胰腺癌患者在確診時已是晚期,因此,發(fā)現(xiàn)胰腺癌發(fā)病的分子機(jī)理,尋找新的生物標(biāo)志物成為胰腺癌早期診斷和治療的迫切需要。
　　 蛋白質(zhì)組學(xué)作為大規(guī)模、高通量的技術(shù)方法能檢測和分析腫瘤組織與正常組織的差異表達(dá)蛋白。而利用生物信息學(xué)方法不僅可以高效地進(jìn)行蛋白質(zhì)組數(shù)據(jù)的分析,并且可以對已知或新的基因產(chǎn)物進(jìn)行全面的功能分析。
　

2、　 本研究利用前期實驗所完成的胰腺癌差異蛋白表達(dá)譜的相關(guān)數(shù)據(jù),通過生物信息學(xué)的方法對差異蛋白進(jìn)行初步分析,以期發(fā)現(xiàn)新的胰腺癌相關(guān)的關(guān)鍵分子靶點和信號通路。
　　 在生物信息學(xué)分析過程中,我們發(fā)現(xiàn)C14orf166基因的相關(guān)生物信息較少,并且與相關(guān)的文獻(xiàn)報道也相對較少。而我們在前期實驗首次發(fā)現(xiàn)C14orf166在具有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的胰腺導(dǎo)管癌組織中高表達(dá),最新的研究也發(fā)現(xiàn)其在胰腺癌患者血清中高表達(dá)。因此,C14orf166可能是胰腺

3、癌早期診斷的生物標(biāo)志物和治療的分子靶點。本研究中,我們采用RNA干擾的方法對C14orf166在胰腺癌侵襲轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制進(jìn)行了研究。
　　 第一章、胰腺癌蛋白表達(dá)譜的生物信息學(xué)分析
　　 目的:通過生物信息學(xué)方法分析胰腺癌蛋白質(zhì)組學(xué)數(shù)據(jù)。
　　 方法：對本實驗室通過蛋白質(zhì)組學(xué)方法篩選出的98種胰腺癌表達(dá)上調(diào)蛋白和61種表達(dá)下調(diào)蛋白使用NCI-Nature、Osprey1.2.0和DAVID軟件分別進(jìn)行信號通路分析

4、、蛋白質(zhì)相互作用分析及基因本體論(Gene Ontology,GO)分析。
　　 結(jié)果：98種表達(dá)上調(diào)基因共涉及50條信號通路,其中富集度P值<0.05的信號通路有15條,最具顯著性的為HIF-alpha轉(zhuǎn)錄因子信號通路；98種基因在“細(xì)胞骨架生成”、“細(xì)胞骨架”及“蛋白結(jié)合”3種GO中富集度最為顯著:在蛋白相互作用網(wǎng)絡(luò)中,連接度最高的為Ezrin和Vimentin。61種表達(dá)下調(diào)基因共涉及27條信號通路,其中富集度P值<0.0

5、5的信號通路有3條,最具顯著性的為p38MAPK信號通路；61種基因僅在“細(xì)胞質(zhì)”一種GO中富集度最為顯著；在蛋白質(zhì)相互作用網(wǎng)絡(luò)中,連接度最高的為EEF1A1和GNB2L1。
　　 結(jié)論：利用生物信息學(xué)方法對蛋白質(zhì)組學(xué)數(shù)據(jù)進(jìn)行挖掘,可以為進(jìn)一步了解胰腺癌的發(fā)病機(jī)制提供新的思路。
　　 第二章、C14orf166促進(jìn)胰腺癌侵襲轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制研究
　　 目的:C14orf166為一種新的腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)蛋白,在胰腺癌患者

6、血清中高表達(dá),因此可作為一種新的胰腺癌候選生物標(biāo)志物。本研究旨在細(xì)胞水平上探討C14orf166對轉(zhuǎn)移相關(guān)基因表達(dá)的影響,以闡明C14orf166促進(jìn)胰腺癌侵襲轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制。
　　 方法：采用RNA干擾技術(shù)降低C14orf166的表達(dá),抑制效果半定量RT-PCR檢測；利用Transwell小室法檢測C14orf166對胰腺癌細(xì)胞株P(guān)ANC-1侵襲與遷移能力的影響；運用實時熒光定量PCR技術(shù)及Western blot方法分析C1