睪丸間質細胞-內源性哇巴因的新來源.pdf

1、本文分三個部分進行探討。
　　第一部：SD大鼠睪丸勻漿和血清中的哇巴因濃度的比較
　　目的：比較SD大鼠的睪丸勻漿和血清中的哇巴因濃度。
　　方法：健康SD大鼠38只，體重200±20g，采用心臟采血獲取血清同時獲取雙側睪丸組織，并使用0.01mol/L的PBS進行睪丸勻漿獲取勻漿上清液。使用大鼠EO ELISA試劑盒檢測大鼠血清和睪丸勻漿中的哇巴因濃度。采用配對樣本t檢驗比較睪丸勻漿和血清中的哇巴因濃度。
　　

2、結果：大鼠血清中的哇巴因濃度為（1.88±0.63）ng/ml，睪丸勻漿中的哇巴因濃度為（2.56±0.53）ng/ml，經配對樣本t檢驗，SD大鼠睪丸勻漿中的哇巴因濃度要明顯高于血清中的哇巴因濃度（P<0.01）。
　　結論：SD大鼠睪丸勻漿中的哇巴因濃度要明顯高于血清中的哇巴因濃度，說明睪丸組織中可能存在分泌哇巴因的細胞。
　　第二部分：精液參數正常男性精漿和血清中的哇巴因濃度的比較
　　目的：比較正常男性精漿和血

3、清中的哇巴因水平。
　　方法：按照人類精液檢驗與處理實驗室手冊第五版中關于正常精液質量的標準來收集27份正常精液參數的精液，并同時采集受試者的靜脈血5ml，分別獲取精漿和血清。采用人EO ELISA試劑盒檢測精漿和血清中的哇巴因水平。采用配對樣本t檢驗比較精漿和血清中的哇巴因濃度。
　　結果：正常精液參數的精漿中的哇巴因水平（2.69±0.23）ng/ml，血清中的哇巴因水平（2.41±0.17）ng/ml，經配對樣本t檢驗

4、，正常精液參數的精漿中的哇巴因濃度要明顯高于血清中的哇巴因濃度（P<0.01）。
　　結論：正常精液參數的精漿中的哇巴因水平要高于血清中的哇巴因水平，說明精子所在的生精小管內的哇巴因濃度要高于血清中哇巴因濃度。
　　第三部分：睪丸間質細胞分泌哇巴因的探索性研究
　　目的：通過原代培養(yǎng)獲取SD大鼠睪丸間質細胞，采用無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)睪丸間質細胞，并在黃體酮的作用下檢測細胞上清液中的哇巴因濃度。
　　方法：選擇200±

5、20g的SD雄性大鼠3只，采用膠原酶I消化法、percoll密度梯度離心法消化并提純睪丸間質細胞，采用3β-HSD染色法鑒定細胞的純度。細胞經過換液傳代4-5次，細胞的純度和活力都達到最佳，細胞在無血清培養(yǎng)基中饑餓12h后，再在無血清的培養(yǎng)基和不同濃度的黃體酮的刺激下培養(yǎng)24h，檢測細胞上清液中的哇巴因濃度。
　　結果：經過膠原酶I消化、percoll密度梯度離心獲取的睪丸間質細胞，經過培養(yǎng)傳代4-5次后細胞的純度達到90％以上。