新型布洛芬衍生物的抗炎活性篩選及機(jī)制初步研究.pdf

1、目的:通過鞭毛蛋白誘導(dǎo)的THP-1細(xì)胞株為炎癥模型，篩選出具有抗炎活性的布洛芬-2-芳基嗎啉乙酯衍生物及初步探討其是否通過抑制NF-κB活性發(fā)揮抗炎作用，為開發(fā)新的非甾體抗炎藥提供基礎(chǔ)的理論支持。
　　方法:分別用同一濃度的布洛芬、布洛芬-2-芳基嗎啉乙酯衍生物孵育THP-11h后，繼而用10 ng/mL鞭毛蛋白刺激，測定各組THP-1細(xì)胞分泌TNF-α和IL-1β的能力，篩選出具有抗炎活性的布洛芬嗎啉乙酯衍生物。繼而測定NF-κ

2、B活化情況及NF-κB信號通路上游TLR5的表達(dá)水平。EHSA檢測細(xì)胞上清液中TNF-α和IL-1β的水平;Western blotting檢測NF-κB p65蛋白和TLR5蛋白表達(dá)水平;EMSA檢測胞核內(nèi)NF-κB的DNA結(jié)合活性;RT-PCR檢測TLR5 mRNA的表達(dá)水平。
　　結(jié)果:
　　1.與正常對照組相比，鞭毛蛋白孵育THP-1細(xì)胞株24h后，分泌TNF-α和IL-1β的能力、NF-κB p65蛋白及DNA結(jié)合

3、活性、TLR5 mRNA表達(dá)水平、THP-1細(xì)胞上TLR5蛋白表達(dá)水平有顯著差異(P＜0.05)。
　　2.與鞭毛蛋白組相比，布洛芬、布洛芬-2-芳基嗎啉乙酯衍生物A和B能下調(diào)TNF-α、IL-1β的水平，布洛芬-2-芳基嗎啉乙酯B下調(diào)作用更明顯（P＜0.01）。
　　3.與鞭毛蛋白組相比，布洛芬、布洛芬-2-芳基嗎啉乙酯A及B均能抑制鞭毛蛋白誘導(dǎo)的TLR5和NF-κBp65表達(dá)。
　　4.與鞭毛蛋白組相比，布洛芬-2

4、-芳基嗎啉乙酯A和B不同程度上抑制核內(nèi)NF-κB的表達(dá)及DNA結(jié)合活性。
　　結(jié)論:
　　1.鞭毛蛋白可激活THP-1細(xì)胞TLR5/NF-κB信號通路進(jìn)而促進(jìn)炎癥因子分泌。
　　2.布洛芬-2-芳基嗎啉乙酯衍生物A和B可阻斷鞭毛蛋白激活TLR5/NF-κB信號通路的作用，從而抑制炎癥因子的分泌。
　　3.布洛芬-2-芳基嗎啉乙酯衍生物A和B可能具有COX-2/NF-κB雙重抑制活性，可為炎癥性疾病的基本治療提供理