頸7神經(jīng)根切斷后靶肌肉運動終板形態(tài)和功能學研究.pdf

1、第一部分：SFMEG用于頸7神經(jīng)根切斷后運動終板功能變化的實驗研究
　　目的：運用刺激性單纖維肌電圖(sSFMEG)對肌肉內(nèi)運動終板功能變化進行細胞水平的研究，來探索頸7神經(jīng)根切斷后的代償過程和可能機制。
　　方法：36只雄性SD大鼠，隨機分成7組，每組6只。右側建成頸7神經(jīng)根切斷模型，左側為正常對照組。用sSFMEG檢測術后第1、2、4、6、8、12周內(nèi)肱三頭肌、背闊肌和伸指總肌(頸7神經(jīng)根主要支配肌肉)的顫抖(Jitte

2、r)和肌纖維密度(FD)變化。所有數(shù)據(jù)收集后，用SPSS17.0軟件進行均值、標準差計算和方差統(tǒng)計學分析。
　　結果：通過對正常SD大鼠418條肌纖維的檢測，正常Jitter值范圍為16.0±19.2μs(MD±3SD)。在術后1-6周內(nèi)，有超過10％的Jitter直超過正常范圍，在第2、4、6周時實驗側靶肌肉內(nèi)MCD比對照側增高有顯著性差異(P<0.05)。僅在術后第4周和6周可很少次數(shù)遇見阻滯。FD值在術后也逐漸增高，但8周和

3、12周后Jitter值恢復到正常水平，F(xiàn)D值仍繼續(xù)高于對照側。
　　結論：在SD大鼠可獲得穩(wěn)定、可靠的Jitter和FD值。SFMEG證實頸7神經(jīng)根切斷術后，第1-6周運動終板功能下降，到第12周基本恢復正常。
　　第二部分：頸7神經(jīng)根切斷后靶肌肉內(nèi)AChRγ/ε亞基表達變化
　　目的：用SYBRGreenⅠ熒光定量聚合酶鏈反應方法，研究頸7神經(jīng)根切斷后靶肌肉內(nèi)乙酰膽堿受體γ-和ε-亞基的mRNA表達水平的變化，結合用

4、WesternBlot檢測同期agrin蛋白表達變化，來探索頸7神經(jīng)根切斷后的代償過程。
　　方法：42只雄性SD大鼠，隨機分成7組，每組6只。右側建成頸7神經(jīng)根切斷模型，左側為正常對照組。用SYBRGreenⅠ熒光定量RT-PCR方法，檢測正常對照組及術后第1、2、4、6、8、12周組肱三頭肌、背闊肌和伸指總肌內(nèi)乙酰膽堿受體γ-、ε-和α-亞基的mRNA表達水平的變化曲線。用Western Blot檢測正常對照組及術后第1、2、

5、4、6、8、12周組同樣三塊靶肌肉內(nèi)agrin蛋白表達水平。所有數(shù)據(jù)收集后，用SPSS17.0軟件進行均值、標準差計算和方差統(tǒng)計學分析。
　　結果：ε-AchR的mRNA在頸7神經(jīng)根切斷術后第1～6周下調表達(P<0.05)，第6周下降到谷底，在第12周基本恢復到正常對照組水平。γ-AchR的mRNA表達在頸7神經(jīng)根切斷術后第1周就開始上升，到第6周達頂峰(P<0.05)，在第12周下降至正常水平。術后第1-6周的agrin蛋白表

6、達明顯高于正常對照組水平(P<0.05)，有統(tǒng)計學差異；術后第8-12周的agrin蛋白表達恢復到正常水平。相同組別的肱三頭肌、背闊肌和伸指總肌內(nèi)γ-/ε-AchR的mRNA比值，agrin蛋白表達基本相同(P>0.05)。
　　結論：運用SYBRGreenⅠ熒光RT-PCR技術和WesternBlot檢測，證實在SD大鼠頸7神經(jīng)根切斷后第1～6周內(nèi)，其靶肌肉內(nèi)γ-/ε-AChR會出現(xiàn)失神經(jīng)的轉換，agrin蛋白表達升高，但在第1

7、2周左右恢復正常。
　　第三部分：頸7神經(jīng)根切斷后靶肌肉運動終板形態(tài)變化
　　目的：通過運用乙酰膽堿酯酶染色、銀-乙酰膽堿酯酶染色，免疫熒光染色和電鏡等多種手段，研究頸7神經(jīng)根切斷后主要靶肌肉內(nèi)運動終板形態(tài)學變化過程，來探索頸7神經(jīng)根切斷術后的代償機制，以將來進一步判斷頸7神經(jīng)根功能。
　　方法：42只雄性SD大鼠，隨機分成7組，每組6只。右側建成頸7神經(jīng)根切斷模型，左側為正常對照組。用乙酰膽堿酯酶染色、銀.乙酰膽堿酯

8、酶染色，免疫熒光染色和電鏡等技術手段檢測術后第1、2、4、6、8、12周的肱三頭肌、背闊肌和伸指總肌(頸7神經(jīng)根主要支配肌肉)內(nèi)運動終板形態(tài)學變化過程。所有數(shù)據(jù)收集后，用SPSS17.0軟件進行均值、標準差計算和方差統(tǒng)計學分析。
　　結果：頸7神經(jīng)根切斷后第1周～第3周，主要靶肌肉內(nèi)運動終板的形態(tài)結構無明顯變化。頸7神經(jīng)根切斷后第4周～第8周，靶肌肉內(nèi)某些區(qū)域出現(xiàn)少數(shù)面積明顯增大，乙酰膽堿酯酶明顯淡染，電鏡下超微結構嚴重退變的運動