大鼠腰5神經(jīng)根牽拉模型建立和機(jī)械牽拉對(duì)神經(jīng)根功能和形態(tài)學(xué)影響.pdf

1、目的：神經(jīng)根牽拉引起的神經(jīng)功能異常在臨床工作中十分常見(jiàn)，如腰椎間盤(pán)突出癥、臂叢神經(jīng)損傷等。關(guān)于機(jī)械牽拉作用對(duì)神經(jīng)組織的研究主要集中在外周神經(jīng)，以至于很多關(guān)于神經(jīng)根方面的觀點(diǎn)都是通過(guò)外周神經(jīng)的研究推論得來(lái)。外周神經(jīng)和神經(jīng)根在解剖結(jié)構(gòu)和生物力學(xué)性質(zhì)上都有明顯不同，所以牽拉神經(jīng)根出現(xiàn)的功能學(xué)和形態(tài)學(xué)變化也必然與外周神經(jīng)不同。但是，目前直接利用神經(jīng)根研究機(jī)械牽拉影響還比較少，特別是用不同的程度和速度牽拉神經(jīng)根研究其出現(xiàn)病理生理學(xué)變化還未見(jiàn)報(bào)道。

2、因此我們利用生物力學(xué)的一些研究方法建立大鼠L5神經(jīng)根機(jī)械牽拉模型，設(shè)定不同的程度和速度進(jìn)行牽拉。然后通過(guò)神經(jīng)電生理的方法研究牽拉后神經(jīng)根神經(jīng)功能的變化，并且在完成測(cè)試后對(duì)神經(jīng)根進(jìn)行組織學(xué)研究，了解牽拉后神經(jīng)根的病理變化以及與神經(jīng)功能改變之間的關(guān)系。 方法：手術(shù)暴露大鼠L5神經(jīng)根，將神經(jīng)背根近端切斷并連接于Endura-Tec-3200材料測(cè)試儀，Wintest軟件控制牽拉的長(zhǎng)度和速度。高速相機(jī)記錄神經(jīng)根標(biāo)記各點(diǎn)間的運(yùn)動(dòng)，記錄的圖

3、像通過(guò)ReadCam軟件傳輸?shù)诫娔X。Image Express軟件分析神經(jīng)根上標(biāo)記各點(diǎn)在圖像中的位移，計(jì)算出牽拉神經(jīng)根實(shí)際牽拉程度。 神經(jīng)根牽拉前后10分鐘內(nèi)，進(jìn)行神經(jīng)電生理測(cè)試。在暴露的同側(cè)坐骨神經(jīng)下方放置刺激電極，L5神經(jīng)背根下放置兩個(gè)記錄電極。分別以0-3V刺激激活神經(jīng)復(fù)合動(dòng)作電位。獲得的信號(hào)記錄到EGAA系統(tǒng)進(jìn)行分析。利用神經(jīng)傳導(dǎo)速度、復(fù)合神經(jīng)動(dòng)作電位波幅的峰值、動(dòng)作電位曲線下的面積三個(gè)指標(biāo)評(píng)價(jià)神經(jīng)根牽拉前后以及不同的牽

4、拉速度和程度對(duì)神經(jīng)功能的影響。電生理實(shí)驗(yàn)結(jié)束后取L5神經(jīng)背根進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察。銀浸染色用來(lái)觀察神經(jīng)纖維撕裂和纖維之間的空隙。 H&E染色觀察神經(jīng)根內(nèi)血管的變化(血管破裂，出血)。另外利用β-APP免疫組織化學(xué)染色的方法來(lái)評(píng)價(jià)神經(jīng)軸突軸漿運(yùn)輸損傷。建立評(píng)分系統(tǒng)并分別對(duì)三種染色方法進(jìn)行評(píng)分。統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：?jiǎn)我蛩氐姆讲罘治龊酮?dú)立樣本的t檢驗(yàn)用來(lái)分析不同牽拉程度和速度對(duì)神經(jīng)功能和形態(tài)學(xué)的影響。Logistic回歸分析出現(xiàn)神經(jīng)傳導(dǎo)完全阻斷的牽

5、拉閾值。同時(shí)線性回歸分析出現(xiàn)的功能學(xué)和形態(tài)學(xué)變化與牽拉程度、速度之間是否存在線形關(guān)系。P<0．05認(rèn)為有顯著性差異。 結(jié)論：建立的大鼠L5神經(jīng)根牽拉模型可以有效研究神經(jīng)根在牽拉作用下的損傷機(jī)制。特別是在牽拉過(guò)程中利用高速相機(jī)采集圖像可以分析不同時(shí)間牽拉程度和力量的變化有助于進(jìn)行神經(jīng)根生物力學(xué)的分析。利用傳導(dǎo)速度，CAP波幅峰值和曲線下面積三個(gè)指標(biāo)分析神經(jīng)功能增加了神經(jīng)電生理試驗(yàn)的準(zhǔn)確性。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果證實(shí)神經(jīng)根牽拉損傷除了與

6、牽拉程度有關(guān)外，還與牽拉時(shí)的速度有關(guān)系。隨著牽拉程度和速度的增加，神經(jīng)功能喪失也逐漸增加。與神經(jīng)功能研究類(lèi)似，牽拉后神經(jīng)根的形態(tài)學(xué)變化與牽拉速度程度都有關(guān)系。說(shuō)明神經(jīng)功能喪失在一定程度上是由于神經(jīng)根形態(tài)結(jié)構(gòu)變化引起，但是可能還有其它的機(jī)制也起作用，如離子通道和神經(jīng)受體系統(tǒng)。實(shí)驗(yàn)中實(shí)驗(yàn)組與假手術(shù)組比較差異并不十分明顯，因此在下一步關(guān)于神經(jīng)根的病理學(xué)研究中還需要進(jìn)一步探討。另外我們發(fā)現(xiàn)了牽拉后神經(jīng)根呈現(xiàn)彌散性損傷，該模型造成的軸突損傷與觀察