Hhcy對(duì)大鼠周?chē)窠?jīng)結(jié)構(gòu)和功能的影響.pdf

1、目的：高同型半胱氨酸血癥(Hhcy)可能為糖尿病周?chē)窠?jīng)病變(DPN)的一個(gè)獨(dú)立危險(xiǎn)因素，并與多種神經(jīng)系統(tǒng)疾病相關(guān)。目前尚未有關(guān)于Hhcy導(dǎo)致周?chē)窠?jīng)病變的報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)研究Hhcy對(duì)大鼠周?chē)窠?jīng)結(jié)構(gòu)和功能的損害作用及氧化應(yīng)激反應(yīng)的影響，探討Hhcy與周?chē)窠?jīng)病變的關(guān)系。 方法：將20只雄性SD大鼠按體重隨機(jī)分為Hhcy模型組(H組，1.5％高蛋氨酸飲食誘發(fā))和正常對(duì)照組(C組)。采用高效液相色譜熒光檢測(cè)法(HPLC)檢測(cè)第0

2、、4、8、12、16、20、24周血漿總同型半胱氨酸(tHcy)水平。實(shí)驗(yàn)進(jìn)行至24周，對(duì)大鼠腓腸神經(jīng)行Luxolfastblue染色，計(jì)數(shù)單位面積有髓神經(jīng)纖維密度、有髓神經(jīng)纖維平均截面積、有髓神經(jīng)纖維平均髓鞘及軸突面積；免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)大鼠腓腸神經(jīng)髓鞘堿性蛋白(MBP)、神經(jīng)絲蛋白(NF)的表達(dá)；電鏡觀察腓腸神經(jīng)超微結(jié)構(gòu)；進(jìn)行擺尾實(shí)驗(yàn)，測(cè)定大鼠熱痛閾擺尾反應(yīng)潛伏期；應(yīng)用肌電圖儀檢測(cè)大鼠尾神經(jīng)運(yùn)動(dòng)和感覺(jué)傳導(dǎo)速度(MCV、SCV)及動(dòng)

3、作電位(CMAP、SNAP)波幅；測(cè)定血清SOD活力、MDA含量、NO含量。 結(jié)果：1.不同時(shí)期兩組大鼠血漿tHey水平變化：第4周H組大鼠血漿thcy水平(19.93±5.20μmol/L)較0周時(shí)(9.33±2.17μmol/L)升高，并高于同時(shí)期C組大鼠(9.26±1.58μmol/L)，其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)，Hhcy大鼠模型建立成功。H組大鼠在第8、12、16、20、24周時(shí)血漿tHcy水平(21.80±

4、4.00μmol/L，22.77±3.12μmol/L，27.82±5.24μmol/L，31.89±5.65μmol/L，30.64±4.35μmol/L)仍高于同時(shí)期C組(9.05±1.91μmol/L，9.10±2.26μmol/L，9.00±1.38μmol/L，9.25±1.56μmol/L，9.60±2.08μmol/L)，為同時(shí)期C組大鼠血漿tHcy水平均值的2～3倍，其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)。2.兩組大鼠腓腸

5、神經(jīng)形態(tài)學(xué)測(cè)定結(jié)果：第24周H組大鼠單位面積(mm2)腓腸神經(jīng)有髓神經(jīng)纖維密度(15790±1431個(gè)/mm2)較C組(16802±1620個(gè)個(gè)/mm2)減低(P<0.05)，有髓神經(jīng)纖維平均截面積及平均髓鞘、軸突面積(21.42±2.09μm2，11.67±1.89μm2，9.31±2.19μm2)均較C組(26.35±1.75μm2，14.64±1.62μm2，12.81±4.19μm2)減少，其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)。

6、3.兩組大鼠腓腸神經(jīng)MBP、NF表達(dá)的比較：H組大鼠腓腸神經(jīng)MBP、NF積分光密度(18421.85±2701.73，12644.54±2195.60)均較C組(24960.93±3081.83，16401.39±2065.12)減低，其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)。4.兩組大鼠腓腸神經(jīng)超微結(jié)構(gòu)的比較：電鏡結(jié)果顯示C組大鼠腓腸神經(jīng)髓鞘板層結(jié)構(gòu)清晰，軸突呈現(xiàn)清晰的神經(jīng)微絲、微管以及線粒體等細(xì)胞器；有髓神經(jīng)纖維每一個(gè)均被一個(gè)完整的雪旺

7、細(xì)胞(Schwallcell，SC)包繞，可見(jiàn)部分無(wú)髓神經(jīng)纖維。H組大鼠腓腸神經(jīng)出現(xiàn)有髓神經(jīng)纖維脫失、節(jié)段性髓鞘、軸突變性、間質(zhì)水腫等改變。無(wú)髓纖維內(nèi)見(jiàn)異常凝集物及水腫。雪旺氏細(xì)胞基膜局部有溶解，細(xì)胞器模糊。C組大鼠未見(jiàn)神經(jīng)微血管內(nèi)皮細(xì)胞病理改變及紅細(xì)胞淤積。H組大鼠神經(jīng)微血管基膜不連續(xù)，出現(xiàn)間隙、水腫，局部有溶解；內(nèi)皮細(xì)胞水腫，異染色質(zhì)趨邊、凝集；部分管腔堵塞，血管內(nèi)有紅細(xì)胞邊集。5.兩組大鼠尾神經(jīng)傳導(dǎo)檢測(cè)及擺尾實(shí)驗(yàn)結(jié)果：H組大鼠尾神

8、經(jīng)MCV(17.28±1.89m/s)、SCV(30.69±3.22m/s)均較C組(21.59±2.52m/s，40.20±3.15m/s)減慢，CMAP、SNAP波幅(0.30±0.10my，4.89±2.00μv)均較C組(0.50±0.17mv，7.81±2.73μv)減低，其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)。H組大鼠熱痛閾擺尾反應(yīng)潛伏期(9.10±1.20s)較C組(6.50±2.07s)明顯延長(zhǎng)，其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0

9、.05)。6.兩組大鼠血清SOD、MDA、NO水平的比較：H組大鼠血清MDA含量(7.50±1.72nmol/L)高于C組(4.08±0.45nmol/L)，H組大鼠血清SOD活力(214.21±11.52U/ml)、NO含量(23.59±4.23μmol/L)均低于C組(310.30±22.48U/ml，29.40±2.0μmol/L)，其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)。 結(jié)論：通過(guò)高蛋氨酸飲食可以誘發(fā)大鼠Hhcy。Hhc