BAI-1在膀胱癌中的表達(dá)及對腫瘤血管抑制作用的研究.pdf

1、第一部分、BAI-1在人膀胱移行上皮細(xì)胞癌組織中的表達(dá)及與P53、MVD、VEGF的相關(guān)性研究
　　 目的：探討B(tài)AI-1在不同分期膀胱移行上皮細(xì)胞癌(bladder transitional cellcarcinoma、BTCC)中的表達(dá)差異以及BAI-1抑制腫瘤血管內(nèi)皮增殖的機(jī)制。
　　 方法：取人BTCC石蠟切片標(biāo)本131例，正常膀胱粘膜組織石蠟切片標(biāo)本28例。正常膀胱粘膜組織切片標(biāo)本為對照組，人BTCC組織切片標(biāo)

2、本為研究組。采用免疫組織化學(xué)SP法分別檢測BAI-1、VEGF、MVD、P53，進(jìn)行半定量統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。取臨床新鮮BTCC組織標(biāo)本21例，正常膀胱粘膜組織9例。應(yīng)用Western blot方法分析BAI-1在BTCC組織及正常膀胱粘膜組織中的表達(dá)差異。
　　 結(jié)果：免疫組化統(tǒng)計(jì)分析及western blot條帶顯示正常膀胱粘膜組織中BAI-1表達(dá)明顯高于BTCC組織，并且與臨床分期相關(guān)，T1局限期BTCC組織中BAI-1表達(dá)遠(yuǎn)高于

3、T2-4進(jìn)展期BTCC組織（P＜0.05）。同時(shí)可以看到BAI-1表達(dá)與VEGF具有反相關(guān)性（r=-0.661，P=0.000）;BAI-1與MVD表達(dá)具有反相關(guān)性(r=-0.406，P=0.002);BAI-1與P53表達(dá)具有反相關(guān)性（r=-0.675，P=0.000）。
　　 結(jié)論：在BTCC組織中BAI-1含量較正常膀胱粘膜組織明顯降低且與BTCC臨床分期相關(guān);BAI-1表達(dá)與VEGF、MVD成負(fù)相關(guān)，與突變型P53成負(fù)相

4、關(guān)性。表明BAI-1可能參與了腫瘤微血管增殖的負(fù)調(diào)節(jié)，而其BAI-1的表達(dá)減少也可能與P53的突變相關(guān)。
　　 第二部分、重組質(zhì)粒載體pReceiver-M61-BAI1轉(zhuǎn)染T24與HUVEC細(xì)胞株的效應(yīng)研究
　　 目的：構(gòu)建并鑒定含有BAI-1基因的脂質(zhì)體質(zhì)粒載體pReceiver-M61-BAI1，并感染人膀胱癌細(xì)胞T24及人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞HUVEC，研究其對T24和HUVEC生物學(xué)影響。
　　 方法：將

5、攜有BAI-1基因的重組真核表達(dá)質(zhì)粒pReceiver-M61-BAI1轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5α并擴(kuò)增，抽提純化質(zhì)粒并進(jìn)行酶切鑒定，pReceiver-M61-BAI1體外轉(zhuǎn)染T24和HUVEC細(xì)胞，篩選穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的細(xì)胞并擴(kuò)增培養(yǎng)，以轉(zhuǎn)染了空質(zhì)粒的T24和HUVEC細(xì)胞為對照，用Q-qPCR及Western blot檢測基因mRNA及蛋白表達(dá)水平。應(yīng)用流式細(xì)胞儀分別檢測BAI1基因轉(zhuǎn)染前后T24細(xì)胞和HUVEC細(xì)胞凋亡情況的變化，MTT法檢測

6、BAI-1基因轉(zhuǎn)染前后T24細(xì)胞和HUVEC細(xì)胞的增殖情況。
　　 結(jié)果：pReceiver-M61-BAI1的酶切鑒定證實(shí)含有目的基因BAI-1;T24和HUVEC細(xì)胞株在轉(zhuǎn)染pReceiver-M61-BAI1為研究組，轉(zhuǎn)染pReceiver-M61為對照組，利用Q-PCR技術(shù)檢測，發(fā)現(xiàn)Q-PCR產(chǎn)物經(jīng)凝膠電泳有明顯的陽性條帶，而對照組則無明顯陽性條帶;Western blot檢測證實(shí)轉(zhuǎn)染pReceiver-M61-BAI1

7、的T24細(xì)胞和HUVEC細(xì)胞的BAI-1蛋白表達(dá)呈陽性;MTT檢測發(fā)現(xiàn)HUVEC細(xì)胞在轉(zhuǎn)染pReceiver-M61-BAI1后12、48、72h的吸光度值明顯低于轉(zhuǎn)染pReceiver-M61的對照組以及轉(zhuǎn)染了pReceiver-M61-BAI1的T24細(xì)胞組。流式細(xì)胞學(xué)檢測證實(shí)轉(zhuǎn)染BAI-1的HUVEC凋亡率明顯高于對照組和轉(zhuǎn)染pReceiver-M61-BAI1的T24組。
　　 結(jié)論：BAI-1具有明顯的血管內(nèi)皮細(xì)胞抑制