BAI-1在膀胱癌中的表達及對腫瘤血管抑制作用的研究.pdf

1、第一部分、BAI-1在人膀胱移行上皮細胞癌組織中的表達及與P53、MVD、VEGF的相關性研究
　　 目的：探討B(tài)AI-1在不同分期膀胱移行上皮細胞癌(bladder transitional cellcarcinoma、BTCC)中的表達差異以及BAI-1抑制腫瘤血管內皮增殖的機制。
　　 方法：取人BTCC石蠟切片標本131例，正常膀胱粘膜組織石蠟切片標本28例。正常膀胱粘膜組織切片標本為對照組，人BTCC組織切片標

2、本為研究組。采用免疫組織化學SP法分別檢測BAI-1、VEGF、MVD、P53，進行半定量統計學分析。取臨床新鮮BTCC組織標本21例，正常膀胱粘膜組織9例。應用Western blot方法分析BAI-1在BTCC組織及正常膀胱粘膜組織中的表達差異。
　　 結果：免疫組化統計分析及western blot條帶顯示正常膀胱粘膜組織中BAI-1表達明顯高于BTCC組織，并且與臨床分期相關，T1局限期BTCC組織中BAI-1表達遠高于

3、T2-4進展期BTCC組織（P＜0.05）。同時可以看到BAI-1表達與VEGF具有反相關性（r=-0.661，P=0.000）;BAI-1與MVD表達具有反相關性(r=-0.406，P=0.002);BAI-1與P53表達具有反相關性（r=-0.675，P=0.000）。
　　 結論：在BTCC組織中BAI-1含量較正常膀胱粘膜組織明顯降低且與BTCC臨床分期相關;BAI-1表達與VEGF、MVD成負相關，與突變型P53成負相

4、關性。表明BAI-1可能參與了腫瘤微血管增殖的負調節(jié)，而其BAI-1的表達減少也可能與P53的突變相關。
　　 第二部分、重組質粒載體pReceiver-M61-BAI1轉染T24與HUVEC細胞株的效應研究
　　 目的：構建并鑒定含有BAI-1基因的脂質體質粒載體pReceiver-M61-BAI1，并感染人膀胱癌細胞T24及人臍靜脈血管內皮細胞HUVEC，研究其對T24和HUVEC生物學影響。
　　 方法：將

5、攜有BAI-1基因的重組真核表達質粒pReceiver-M61-BAI1轉化大腸桿菌DH5α并擴增，抽提純化質粒并進行酶切鑒定，pReceiver-M61-BAI1體外轉染T24和HUVEC細胞，篩選穩(wěn)定轉染的細胞并擴增培養(yǎng)，以轉染了空質粒的T24和HUVEC細胞為對照，用Q-qPCR及Western blot檢測基因mRNA及蛋白表達水平。應用流式細胞儀分別檢測BAI1基因轉染前后T24細胞和HUVEC細胞凋亡情況的變化，MTT法檢測

6、BAI-1基因轉染前后T24細胞和HUVEC細胞的增殖情況。
　　 結果：pReceiver-M61-BAI1的酶切鑒定證實含有目的基因BAI-1;T24和HUVEC細胞株在轉染pReceiver-M61-BAI1為研究組，轉染pReceiver-M61為對照組，利用Q-PCR技術檢測，發(fā)現Q-PCR產物經凝膠電泳有明顯的陽性條帶，而對照組則無明顯陽性條帶;Western blot檢測證實轉染pReceiver-M61-BAI1

7、的T24細胞和HUVEC細胞的BAI-1蛋白表達呈陽性;MTT檢測發(fā)現HUVEC細胞在轉染pReceiver-M61-BAI1后12、48、72h的吸光度值明顯低于轉染pReceiver-M61的對照組以及轉染了pReceiver-M61-BAI1的T24細胞組。流式細胞學檢測證實轉染BAI-1的HUVEC凋亡率明顯高于對照組和轉染pReceiver-M61-BAI1的T24組。
　　 結論：BAI-1具有明顯的血管內皮細胞抑制