環(huán)孢素A轉(zhuǎn)換為雷帕霉素長期作用對大鼠移植腎和睪丸的功能和組織學(xué)的影響.pdf

1、神經(jīng)鈣蛋白抑制劑（包括環(huán)孢素A和他克莫司）一直是過去二十多年固體器官移植術(shù)后免疫抑制方案的基石。環(huán)孢素A（CsA）在上世紀八十年代初期開始運用于臨床后革命化了移植腎的臨床效果，使腎移植成為處理各種終末期腎病的最有效的治療方案。然而，盡管移植腎的近期成功率已明顯提高（1年的人/腎存活率可達90％），但其長期存活率的改善并不樂觀。影響移植腎長期存活的因素很多，除由于心血管、感染和惡性腫瘤導(dǎo)致的受者帶功能腎死亡外，慢性移植腎腎?。–AN）的發(fā)

2、生是導(dǎo)致移植腎遠期功能喪失的最主要原因。研究發(fā)現(xiàn)各種免疫和非免疫的因素導(dǎo)致了慢性移植腎腎病的發(fā)生，而神經(jīng)鈣蛋白抑制劑（CNI）的毒性是一重要的非免疫的因素。此外，神經(jīng)鈣蛋白抑制劑尚有致動脈性高血壓、高脂血癥、糖尿病和神經(jīng)毒等毒副作用，這些副作用無疑會加速遠期移植腎的丟失。因此采用其它一些具同等免疫抑制效應(yīng)而毒副作用相對較小的新型免疫抑制劑如雷帕霉素來代替神經(jīng)鈣蛋白抑制劑一直是移植界用以提高移植腎遠期存活率的策略。 已有大量文獻報

3、道腎移植術(shù)后將環(huán)孢素A轉(zhuǎn)換為雷帕霉素后多數(shù)病人的肌酐清除率得以改善并減緩了移植腎組織學(xué)病變的進展。然而這些研究的隨訪時間都很短，多數(shù)少于12月，而且就我們所知至今尚無轉(zhuǎn)換時間超過2年的長期隨訪結(jié)果的報道。因而，腎移植術(shù)后將環(huán)孢素A轉(zhuǎn)換為雷帕霉素后短期的肌酐清除率升高是否會帶來長期的腎功能改善的前景尚不能明確。另外，有文獻報道雷帕霉素的使用導(dǎo)致了男性性生殖功能的損害。因而，可能會導(dǎo)致性生殖功能受損是臨床環(huán)孢素A轉(zhuǎn)換為雷帕霉素需重視的一大問

4、題。但據(jù)我們所知，文獻尚無有關(guān)腎移植術(shù)后環(huán)孢素A轉(zhuǎn)換為雷帕霉素對男性性生殖功能的影響的相關(guān)研究報道。此外，由于睪丸組織難以獲取，文獻也無雷帕霉素致性生殖功能損害時睪丸組織學(xué)變化的研究資料。 在本課題研究中，我們采用Fisher→Lewis移植腎動物模型研究并比較了環(huán)孢素A轉(zhuǎn)換為雷帕霉素和環(huán)孢素A持續(xù)使用對移植腎大鼠長期作用后腎臟和睪丸的功能和組織學(xué)的影響。 第一部分環(huán)孢素A（CsA）轉(zhuǎn)換為雷帕霉素（Rapa）對大鼠移植腎

5、功能和組織學(xué)的長期作用結(jié)果 目的：研究并比較CsA轉(zhuǎn)換為Rapa與CsA持續(xù)使用對大鼠移植腎的長期作用結(jié)果。 方法：建立Fisher→Lewis大鼠移植腎模型，予以10天1.5mg/kg/d的CsA后隨機分成4組：第1組（轉(zhuǎn)換為Rapa組，n=10）予以10mg/kg/d的CsA至第8周后轉(zhuǎn)換為0.5mg/kg/d的Rapa至第24周；第2組（CsA持續(xù)使用組，n=10）予以10mg/kg/d的CsA至第24周；第3組（

6、CsA撤離組，n=8）予以10mg/kg/d的CsA至第8周后再予以安慰劑至第24周；第4組（對照組，n=8）予以安慰劑至第24周。另6只Lewis→Lewis同系移植鼠作為第5組（同系移植組）。每4周抽血查血肌酐和血紅蛋白濃度，留24小時尿查尿肌酐濃度和蛋白定量，測量大鼠體重并計算內(nèi)生肌酐清除率。第24周時處死動物，獲取移植腎標本行組織學(xué)和免疫組化研究并采用定量PCR檢測轉(zhuǎn)換生長因子β1和血小板源性生長因子A鏈的表達。 結(jié)果：

7、血肌酐、內(nèi)生肌酐清除率在第1組（轉(zhuǎn)換為Rapa組）、第2組（CsA持續(xù)使用組）和第3組（CsA撤離組）之間從第4周到24周并無明顯差異，但在第4組對照組第24周時可見較其它三組有統(tǒng)計學(xué)差異的較高的血肌酐濃度和較低的內(nèi)生肌酐清除率。對比對照組（第4組），CsA和Rapa的使用（第1，2，3組）均顯著地降低了尿蛋白的排泄量，這種尿蛋白排泄的差異在第12周時開始出現(xiàn)并一直增加延續(xù)至24周。CsA轉(zhuǎn)換為Rapa（第1組）較CsA的持續(xù)使用（第2

8、組）進一步降低了尿蛋白的排泄，這種差異在第24周達到統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.006）。CsA和Rapa的使用（第1，2，3組）均大體保護了移植腎組織學(xué)的破壞；而對比CsA持續(xù)使用或撤離（第2、3組），CsA轉(zhuǎn)換為Rapa（第1組）則進一步地降低了移植腎組織學(xué)Banff評分、顯著地減少了腎組織中浸潤的CD68陽性的巨噬細胞數(shù)和CD5陽性的淋巴細胞數(shù)以及TGF—β1和α—SMA的染色強度以及轉(zhuǎn)換生長因子β1和血小板源性生長因子A鏈的mRNA的表

9、達量。 結(jié)論：對比CsA的持續(xù)使用，CsA轉(zhuǎn)換為Rapa減少了移植腎遠期的尿蛋白的排泄、減緩了遠期移植腎組織學(xué)的損害并下調(diào)了纖維相關(guān)基因的表達。這一免疫抑制方案可能改善臨床移植腎的遠期成功率。 第二部分環(huán)孢素A（CsA）轉(zhuǎn)換為雷帕霉素（Rapa）長期作用對移植腎大鼠睪丸功能和形態(tài)學(xué)的影響 目的：研究并比較CsA轉(zhuǎn)換為Rapa與CsA長期作用對移植腎大鼠睪丸功能和組織形態(tài)學(xué)的影響。 方法：建立Fisher→

10、Lewis大鼠移植腎模型，予以10天1.5mg/kg/d的CsA后隨機分成4組：第1組（轉(zhuǎn)換為Rapa組，n=10）予以10mg/kg/d的CsA至第8周后轉(zhuǎn)換為0.5mg/kg/d的Rapa至第24周；第2組（CsA持續(xù)使用組，n=10）予以10mg/kg/d的CsA至第24周；第3組（CsA撤離組，n=8）予以10mg/kg/d的CsA至第8周后再予以安慰劑至第24周；第4組（對照組，n=8）予以安慰劑至第24周。另6只Lewis→

11、Lewis同系移植鼠作為第5組（同系移植組）。第24周時處死動物，抽血測睪酮（T）、卵泡刺激素（FSH）和黃體生成素（LH）值，并計算T/LH比率。獲取右側(cè)睪丸標本，記錄其重量并行組織學(xué)分析，光鏡下隨機測量曲細精管直徑，并采用一量化的組織學(xué)評分標準評估睪丸的組織學(xué)損傷。在第1組、第2組和第5組隨機選取2例標本行超微結(jié)構(gòu)檢查。 結(jié)果：對性激素的影響上，CsA的使用（第2、3組）和轉(zhuǎn)換為Rapa（第1組）對比同系移植組（第5組，1.

12、05±0.17ng/ml）均導(dǎo)致了大鼠血清睪酮水平的下降，并同時伴LH和FSH水平的升高，但只有轉(zhuǎn)Rapa組（第1組，0.85±0.09 ng/ml）的睪酮水平下降達到統(tǒng)計學(xué)差異水平（p=0.008）。在T/LH比率上，同系移植組（第5組，0.74±0.14）較其它組均顯著為高，而轉(zhuǎn)換為Rapa組（第1組）T/LH值最低（0.59±0.03。CsA的使用（第2、3組）和轉(zhuǎn)換為Rapa（第1組）對比同系移植組（第5組，243.0±10.1

13、mg，313.5±10.1um）均導(dǎo)致了大鼠右側(cè)睪丸重量和平均曲細精管直徑的顯著下降，尤以轉(zhuǎn)Rapa組（第1組，206.2±6.4mg，294.2±15.8um）下降最為明顯。在睪丸組織學(xué)損傷評分上，CsA轉(zhuǎn)換為Rapa（第1組）和CsA的持續(xù)使用（第2組）對比同系移植組（第5組，1.8±0.8）均顯著為高，CsA轉(zhuǎn)換為Rapa組（第1組，8.3±1.6）較CsA持續(xù)使用組（第2組，7.7±1.5）損傷評分更高但未達統(tǒng)計學(xué)差異水平（P=

14、0.388）。電鏡檢查發(fā)現(xiàn)CsA轉(zhuǎn)換為Rapa（第1組）導(dǎo)致Leydig細胞線粒體腫脹、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴張和Sertoli細胞的細胞器顯著減少；CsA的持續(xù)使用（第2組）導(dǎo)致Leydig細胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴張和Sertoli細胞細胞器的減少，而同系移植組（第5組）睪丸組織的超微結(jié)構(gòu)未發(fā)現(xiàn)明顯異常。 結(jié)論：CsA轉(zhuǎn)換為Rapa長期作用對比CsA的持續(xù)使用導(dǎo)致了移植腎大鼠睪丸更嚴重的功能和組織學(xué)的損傷。臨床上對于男性移植患者尤其是年輕患者在采用這種