黃連素對乏氧前列腺癌細(xì)胞株體內(nèi)與體外放射增敏作用及其機制研究.pdf

1、目的：研究黃連素對乏氧人前列腺癌細(xì)胞株LNCaP體內(nèi)及體外的放射增敏作用并探討其可能的作用機制。
　　方法：體內(nèi)：應(yīng)用MTT方法檢測黃連素對LNCaP細(xì)胞生存率的影響；通過細(xì)胞克隆形成實驗，觀察不同濃度黃連素對LNCaP細(xì)胞放療敏感性的影響；采用流式細(xì)胞儀，檢測細(xì)胞凋亡率，免疫印跡法（WB）、免疫熒光法檢測細(xì)胞內(nèi)HIF-1α、VEGF蛋白的表達(dá)變化。體外：建立前列腺癌LNCaP細(xì)胞裸鼠移植瘤模型；移植瘤平均體積增至約125mm3時

2、，采用隨機數(shù)字表法將裸鼠24只分4組：對照組、單純藥物組（5mg/kg黃連素）、單純照射組（8Gy）、藥物+照射組（5mg/kg黃連素+8Gy）。36天后測量移植瘤體積，計算腫瘤體積抑制率，并對移植瘤標(biāo)本進(jìn)行Western blot檢測移植瘤組織中HIF-1α及VEGF蛋白的表達(dá)。
　　結(jié)果：體內(nèi)：黃連素對LNCaP細(xì)胞有一定的毒性作用，并顯現(xiàn)劑量-效應(yīng)和時間-效應(yīng)關(guān)系，24h時黃連素的IC50為220.36μM。經(jīng)克隆形成實驗證

3、實，黃連素對LNCaP細(xì)胞有明顯的增敏作用，并且隨著黃連素濃度的增加，放療敏感性增加，30μM、50μM的黃連素對LNCaP細(xì)胞的放射增敏比（SER）分別為：1.40、1.77。藥物聯(lián)合照射組的乏氧細(xì)胞凋亡率較單純照射組的乏氧細(xì)胞凋亡率明顯增加，并且隨著藥物濃度的增加，凋亡率增加；WB和免疫熒光結(jié)果均顯示藥物聯(lián)合照射組較對照組、單純藥物組和單純照射組的HIF-1α、VEGF蛋白的表達(dá)明顯降低，與單純照射組比較，有統(tǒng)計學(xué)意義(p＜0.05

4、)。體外：藥物+照射組裸鼠移植瘤體積為（505.0±110.7） mm3，顯著低于單純藥物組（1384.2±182.0）mm3和單純照射組(1119.7±248.2) mm3（p＜0.05），其抑制率達(dá)74.3％。Western blot檢測發(fā)現(xiàn)，藥物+照射組移植瘤組織中HIF-1α、VEGF蛋白表達(dá)水平較單純照射組明顯降低。
　　結(jié)論：黃連素對乏氧人前列腺癌細(xì)胞株LNCaP細(xì)胞體內(nèi)及體外均有放射增敏作用，其機制可能與抑制HIF-