黃連素對(duì)LPS誘導(dǎo)離體大鼠心臟功能障礙的影響及機(jī)制研究.pdf

1、　　目的
　　心功能障礙是感染性休克常見(jiàn)的并發(fā)癥,約有40%的感染性休克病人出現(xiàn)左、右心室功能障礙。多數(shù)感染性休克由革蘭氏陰性細(xì)菌感染引起,內(nèi)毒素或脂多糖(LPS)在這種感染的發(fā)病機(jī)制中起重要作用。細(xì)胞因子如腫瘤壞死因子α(TNFα)生成增加、心肌細(xì)胞內(nèi)Ca2+穩(wěn)態(tài)異常,是內(nèi)毒素性心功能障礙的重要機(jī)制。黃連素有正性肌力、負(fù)性頻率和抗心律失常作用,能防治充血性心力衰竭。但黃連素對(duì)LPS性心功能障礙是否具有防治作用尚不清楚。因此,本研

2、究旨在觀察黃連素對(duì)LPS性心功能障礙的防治作用及機(jī)制,為臨床防治感染性休克引起的心功能障礙提供新的治療藥物和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法
　　實(shí)驗(yàn)分三部分進(jìn)行：
　　1.采用Langendorff裝置灌流離體大鼠心臟,用LPS復(fù)制大鼠心功能障礙的模型,觀察黃連素對(duì)LPS引起的心功能障礙的影響；
　　2.培養(yǎng)乳鼠(1-3 d的SD大鼠)心肌細(xì)胞,采用Fura-2/AM雙波長(zhǎng)熒光測(cè)定法測(cè)定心肌細(xì)胞內(nèi)游離鈣離子濃度([Ca2+

3、]i),觀察LPS和黃連素對(duì)心肌[Ca2+]i的影響；
　　3.培養(yǎng)乳鼠(1-3 d的SD大鼠)心肌細(xì)胞,用酶聯(lián)免疫吸附分析(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)方法測(cè)定心肌細(xì)胞培養(yǎng)上清液TNFα含量,觀察黃連素對(duì)LPS處理的心肌細(xì)胞生成TNFα的影響。
　　結(jié)果 1.黃連素組、黃連素+LPS組和LPS組大鼠離體心臟灌流120 min時(shí)的心率顯著低于預(yù)灌時(shí)(0 min)的心率

4、(P<0.05)；心臟灌流120 min時(shí)LPS組的心率低于對(duì)照組,而和黃連素+LPS組比較,未見(jiàn)明顯差別。100μg/mL LPS灌流離體大鼠心臟20 min,120 min后左室內(nèi)壓上升最大速率和下降最大速率(±dp/dtmax)均明顯低于對(duì)照組,而黃連素+LPS組心臟灌流120 min,±dp/dtmax明顯高于LPS組；
　　2.KCl刺激對(duì)照組心肌細(xì)胞,心肌[Ca2+]i明顯高于刺激前；而黃連素預(yù)處理組,KCl刺激后心肌

5、[Ca2+]i與KCl刺激前比較無(wú)明顯差異(P>0.05)。異丙腎上腺素刺激心肌細(xì)胞后其[Ca2+]i明顯高于刺激前；黃連素預(yù)處理組,異丙腎上腺素刺激后心肌[Ca2+]i也明顯高暨南大學(xué)碩士學(xué)位論文黃連素對(duì)LPS誘導(dǎo)離體大鼠心臟功能障礙的影響及機(jī)制研究于異丙腎上腺素刺激前的心肌[ca門i(只0.05)。對(duì)照組心肌細(xì)胞在LPs刺激10 min后,心肌【ca門、明顯高于刺激前(只0.05),一定濃度的黃連素(1、2卿01/L)預(yù)處理10 m

6、in組,LPS刺激的「caz+]i也明顯高于刺激前。LPS處理心肌細(xì)胞lh后,心肌〔Caz+]、明顯低于對(duì)照組,黃連素處理心肌細(xì)胞lh后,心肌「caz+」、明顯高于對(duì)照組。黃連素+LPS處理組心肌[caz+],明顯高于LPS組,和對(duì)照組比較無(wú)顯著性差異。LPS處理心肌細(xì)胞Zh,心肌「Caz+]、明顯高于對(duì)照組,黃連素處理心肌細(xì)胞Zh后,心肌[Caz+〕,也明顯高于對(duì)照組。黃連素+LPS處理組的心肌「caz+],明顯低于LPS組,但與對(duì)照

7、組比較無(wú)顯著性差異。3.用不同濃度(1卜g/。L、5林g/mL、10卜g/mL、20仆g/mL)LpS處理的心肌細(xì)胞釋放TNF。的水平均明顯高于對(duì)照組(只0.05)。黃連素(2 nmol/mL)+LpS(10林g/mL)和黃連素(4nmol/mL)十LpS(10卜g/mL)組的TNFa水平均顯著低于tPS(10林g/mL)組(只0.05)。結(jié)論
　　LPS對(duì)離體大鼠心臟具有負(fù)性頻率作用,LPS灌流導(dǎo)致心肌收縮和舒張功能障礙；黃連素