賁門腺癌microRNA表達譜的篩查與驗證.pdf

1、目的：篩查并驗證出賁門腺癌表達的microRNA表達譜，為賁門腺癌的發(fā)病機制研究、早期預(yù)警、新的治療方法及靶向藥物研發(fā)提供理論依據(jù)。
　　方法：從2011年12月開始建立腫瘤科的賁門癌腫瘤組織和癌旁正常組織的組織標本庫備用。所有試驗標本均由實驗員攜帶便攜式液氮罐至手術(shù)室收集，賁門腺癌腫瘤經(jīng)外科醫(yī)師切除后，于30分鐘內(nèi)自手術(shù)標本上切除足夠的癌組織、癌旁組織和正常組織，隨即編號放入便攜式液氮罐冷凍，后快速轉(zhuǎn)入腫瘤科-80℃超低溫冰箱中

2、組織標本庫長期保存?zhèn)溆谩８鶕?jù)之前簽訂的協(xié)議，在賁門癌腫瘤組織標本庫中隨機選取20例病人的賁門腺癌腫瘤組織及其對應(yīng)的癌旁正常組織，送至上海康成生物工程有限公司，使用Exiqon公司16.0版本的LNATM microRNA芯片（涵蓋1000個已知的microRNAs）對賁門腺癌腫瘤組織及癌旁正常組織進行了檢測，初步篩查出在賁門癌腫瘤組織和癌旁組織中呈差異性表達的microRNA。根據(jù)microRNA芯片的掃描結(jié)果，擴大樣本量，設(shè)計引物，應(yīng)

3、用ABI7500實時熒光定量 PCR儀對篩查出的呈顯著差異表達的 microRNA在30對賁門腺癌腫瘤組織和癌旁正常組織中的差異表達情況的進行擴增、分析、驗證。microRNA芯片的篩查結(jié)果由上?？党缮锕こ逃邢薰矩撠?zé)分析和處理。qRT-PCR的驗證結(jié)果采用均數(shù)±標準差的格式表示，使用 SPSS17.0統(tǒng)計軟件包進行配對 t檢驗分析和 Wilcoxon符號秩和檢驗分析；檢驗水準設(shè)定在α=0.05水平。
　　結(jié)果：microRNA

4、芯片的篩查結(jié)果發(fā)現(xiàn)發(fā)現(xiàn)在賁門腺癌腫瘤組織和癌旁正常組織中共存在209種 microRNA的差異表達，其中的microRNA-645等50個microRNA在癌和癌旁組織中呈顯著差異表達。擴大樣本量，設(shè)計引物對這50種在賁門腺癌癌和癌旁組織中呈顯著差異表達的 microRNA進行 PCR擴增驗證，結(jié)果發(fā)現(xiàn) microRNA-20b、microRNA-195、microRNA-337、microRNA-338、microRNA-433、mi

5、croRNA-10a和microRNA-645等16種microRNA在賁門腺癌的腫瘤組織和癌旁組織中的表達差異仍有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），可以驗證出與microRNA芯片篩查預(yù)測結(jié)果一致的在癌組織中的上調(diào)或下調(diào)趨勢；而其余34種microRNA在兩者之間的表達差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），無法驗證出與microRNA芯片篩查預(yù)測結(jié)果一致的在癌組織中的上調(diào)或下調(diào)趨勢。
　　結(jié)論：賁門癌的microRNA表達譜包括 micr