他克莫司，雷帕霉素及抗白介素-2抗體對(duì)胰島移植糖尿病小鼠長(zhǎng)期存活效果的研究.pdf

1、研究背景：Ⅰ型糖尿病(IDDM)是一種以胰島β-細(xì)胞破壞為特征的、有多種發(fā)病機(jī)制的自身免疫性疾病，常導(dǎo)致腎功能衰竭、視網(wǎng)膜及神經(jīng)系統(tǒng)的病變。嚴(yán)格的控制血糖是Ⅰ型糖尿病患者最有效的防止和減少慢性并發(fā)癥的途徑，為了實(shí)現(xiàn)這個(gè)目標(biāo)，糖尿病患者必須接受嚴(yán)格的復(fù)合胰島素治療及準(zhǔn)確的血糖監(jiān)測(cè)。外源性的胰島素替代治療雖然能夠成功的防治糖尿病急性并發(fā)癥，減少死亡，但對(duì)于糖尿病慢性并發(fā)癥無效，而且，外源性胰島素從來未能接近正常細(xì)胞分泌模式，即使在無低血糖期

2、，血糖也很少控制在正常范圍。因此胰島細(xì)胞的移植能夠具有在不增加低血糖發(fā)生的情況下阻止糖尿病并發(fā)癥的進(jìn)展的作用。胰島移植長(zhǎng)期以來被認(rèn)為是治療Ⅰ型糖尿病的一種頗具吸引力的療法，并具有相當(dāng)?shù)膬?yōu)勢(shì)。為了研究胰島移植中tacrolimus,rapamycin和AntiIL-2antibody在嚙齒類動(dòng)物之間防止排斥反應(yīng)的機(jī)理和現(xiàn)象，本課題選用Wistar大鼠為胰島移植物的供體，C57BL/6(B6)作為移植受體，移植物經(jīng)分離和純化后被移植入受體小

3、鼠的腎包膜下，為了更好的模擬臨床胰島移植的效果，根據(jù)EdmontonProtocol方案進(jìn)行用藥。小鼠被隨機(jī)的分為5組，依次是：control組，tacrolimus+rapamycin組，tacrolimus+AntiIL-2antibody組，rapamycin+AntiIL-2antibody組，tacrolimus+rapamycin+AntiIL-2antibody組. 實(shí)驗(yàn)方法：供體胰島分離和純化采用Wistar大鼠

4、進(jìn)行，胰腺組織經(jīng)膠原酶P消化，通過Ficoll梯度離心分離純化之后，在37℃(98.6°F)，5％的二氧化碳溫箱中孵育不超過2小時(shí)，將分離純化后的胰島細(xì)胞移植入C57BL/6(B6)受者小鼠腎包膜下，每只小鼠移植300-400個(gè)胰島為宜。移植后每周三次對(duì)各組小鼠應(yīng)用血糖儀進(jìn)行尾靜脈采血，測(cè)量血糖，每周三次，連續(xù)100天受體血糖水平不超過18mmol/L，即為長(zhǎng)期存活。組織學(xué)檢查：于胰島細(xì)胞移植第10天和第105天小鼠腎臟做病理切片，10

5、％甲醛包埋，石蠟包埋，蘇木精-伊紅染色，鏡下觀察組織學(xué)變化。糖耐量試驗(yàn)：術(shù)后兩周，進(jìn)行糖耐量試驗(yàn)，所有受體B6小鼠均給予20％葡萄糖(1g/kg體重)腹腔內(nèi)注射，于注射前和注射后30，60，90，120min測(cè)定血糖，并與對(duì)照組糖尿病小鼠做統(tǒng)計(jì)學(xué)兩兩比較。外周血CD4+，CD4+T細(xì)胞亞群及IL-2含量試驗(yàn)并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。 結(jié)果：應(yīng)用不同免疫抑制劑方案后，移植受體存活時(shí)間比較應(yīng)用不同免疫抑制劑方案后，移植受體平均存活時(shí)間如下表

6、，一般認(rèn)為移植物存活時(shí)間超過100天即為長(zhǎng)期存活。可以看出應(yīng)用Tacrolumus+Rapamycin的組，存活時(shí)間約為140天左右，85.7％的小鼠存活時(shí)間超過100天，明顯高于對(duì)照組(P=0.000)，具有顯著性差異(表6-1)；應(yīng)用Tacrolumus+Rapamycin+AntiIL-2antibody的組(n=7)，移植受體存活時(shí)間平均約為161天左右，其中28.5％的小鼠存活時(shí)間超過200天，一只為109天，五只小鼠存活時(shí)間

7、超過150天，兩只超過200天，與對(duì)照組相比，(P＜0.001)，具有顯著性差異。各組腹腔內(nèi)注射葡萄糖后，對(duì)照組血糖濃度明顯高于其他四組，60分鐘以后，對(duì)照組血糖水平下降緩慢，直到120分鐘仍然維持高血糖狀態(tài)，恢復(fù)緩慢，另外四組中T+A+R聯(lián)合用藥組血糖最終恢復(fù)到糖耐量試驗(yàn)前的水平，與對(duì)照組相比，有顯著性差異，(P＜0.001)。 結(jié)論：根據(jù)Edmontonprotocol，選擇性的應(yīng)用Tacrolimus，Rapamycin，