雷帕霉素衍生物（依維莫司、地磷莫司、佐他莫司）對胰島毒性的研究.pdf

1、目的:免疫抑制劑的開發(fā)與運(yùn)用一直推動著器官移植領(lǐng)域的發(fā)展。自21世紀(jì)初，Edmonto方案被提出以后，胰島移植領(lǐng)域發(fā)生的了質(zhì)的飛躍，尤其是雷帕霉素與他克莫司的開發(fā)與利用，使得該方案得到廣泛的認(rèn)可與臨床運(yùn)用。然而隨著研究的不斷深入，研究者們發(fā)現(xiàn)免疫抑制劑在延長移植物存活時間的同時，也給胰島本身帶來了嚴(yán)重的毒性作用，包括抑制胰島細(xì)胞增殖，促進(jìn)胰島細(xì)胞凋亡，抑制胰島細(xì)胞分泌胰島素等。應(yīng)用免疫抑制劑產(chǎn)生的這些不良反應(yīng)在抗器官移植排斥反應(yīng)時發(fā)生。

2、它們作為抗腫瘤藥物應(yīng)用于臨床時也會誘發(fā)高血糖的現(xiàn)象。所以，如何避免免疫抑制劑對胰島的毒副作用從而延長胰島移植物的存活，是胰島移植面臨的一大難題。一旦免疫抑制劑出現(xiàn)對胰島的毒性，使胰島功能被破壞，胰島移植也就面臨需要再次移植或使用胰島素干預(yù)治療。雷帕霉素是胰島移植應(yīng)用中最常用的免疫抑制劑之一，但是由于它對胰島本身存在毒性作用，促使新型免疫抑制劑的不斷開發(fā)。雷帕霉素衍生物包括依維莫司、地磷莫司、佐他莫司、替西羅莫司。它們目前主要應(yīng)用于抗腫瘤

3、治療，依維莫司同時應(yīng)用于器官移植抗排斥反應(yīng)的防治。這些衍生物是否與雷帕霉素一樣也對胰島具有毒性目前鮮有研究。本論文，首次通過細(xì)胞系體外研究雷帕霉素衍生物依維莫司、地磷莫司、佐他莫司對胰島的毒性作用。
　　方法:采用小鼠胰島β細(xì)胞株MIN6細(xì)胞作為體外研究胰島細(xì)胞的對象。分別在含有不同濃度的依維莫司、地磷莫司、佐他莫司培養(yǎng)基中孵育MIN6細(xì)胞24h、48h。將溶劑無水乙醇處理的MIN6細(xì)胞設(shè)為陰性對照組，環(huán)孢素A和三氧化二砷處理的M

4、IN6細(xì)胞設(shè)為陽性對照組，觀察三種雷帕霉素衍生物對MIN6細(xì)胞的增殖、細(xì)胞活力、細(xì)胞周期、凋亡的影響。
　　結(jié)果:在增殖實(shí)驗(yàn)中，我們發(fā)現(xiàn)，從藥物濃度升高至1ng/ml開始，這三種雷帕霉素衍生物均對MIN6細(xì)胞的增殖產(chǎn)生抑制作用，藥物濃度呈劑量依賴性，且三種衍生物抑制MIN6細(xì)胞增殖的效果比雷帕霉素更加顯著。在細(xì)胞活力測定實(shí)驗(yàn)中，三種衍生物在100ng/ml時能顯著抑制細(xì)胞活力，其中佐他莫司濃度在10ng/ml時，就已經(jīng)出現(xiàn)對細(xì)胞活

5、力的抑制作用。流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示，在細(xì)胞周期和凋亡實(shí)驗(yàn)中，三種衍生物對MIN6細(xì)胞的影響與陰性對照相比組，呈現(xiàn)抑制G1期向S期轉(zhuǎn)變的趨勢和促進(jìn)細(xì)胞凋亡的趨勢，但差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　結(jié)論:通過體外研究依維莫司、地磷莫司、佐他莫司，我們對雷帕霉素這三種衍生物有了進(jìn)一步的認(rèn)識，它們與雷帕霉素一樣均能抑制胰島β細(xì)胞的增殖與細(xì)胞活力;并且我們發(fā)現(xiàn)，在對β細(xì)胞增殖與活力的影響中，三種衍生物與雷帕霉素相比具有更明顯的抑制作用。因此，我們認(rèn)