U2依賴型mRNA剪接復(fù)合體相關(guān)基因多態(tài)與原發(fā)性肝癌發(fā)生風(fēng)險的關(guān)聯(lián)研究.pdf

1、背景:原發(fā)性肝癌（Primary liver cancer，PLC，以下簡稱肝癌）病死率高，目前居于全球癌癥死因第三位，肝癌在我國發(fā)病人數(shù)占全球發(fā)病人數(shù)的半數(shù)以上。肝癌發(fā)病隱匿，一旦發(fā)現(xiàn)往往預(yù)后很差。因此，探討其危險因素并進行有針對性的預(yù)防是減少肝癌人群健康危害的關(guān)鍵。在癌癥發(fā)生的遺傳和環(huán)境因素研究中，目前mRNA剪接復(fù)合體相關(guān)基因突變與腫瘤的關(guān)系備受關(guān)注。mRNA選擇性剪接影響著人類90％以上的基因表達，這個途徑一旦發(fā)生異常，則可能影

2、響包括細胞增殖、發(fā)育與分化等環(huán)節(jié)的多個基因的正常剪接過程，導(dǎo)致腫瘤發(fā)生。2011年以來，Nature、Cell等雜志先后報道剪接復(fù)合體基因突變，尤其是U2核糖核蛋白體依賴型剪接復(fù)合體相關(guān)基因（包括U2AF35、U2AF65、SF1、SRSF1、SF3A1、SF3B1和PRPF40B等）突變與血液腫瘤如慢性髓細胞性白血病以及實體瘤如胰腺癌、乳腺癌以及黑色素瘤等發(fā)生有關(guān)，我們課題組的前期研究也發(fā)現(xiàn)U2AF65的基因多態(tài)與胰腺癌的發(fā)生有關(guān)，但

3、上述基因與肝癌發(fā)生風(fēng)險關(guān)聯(lián)尚未見報道。
　　目的:
　　1、探討U2依賴型mRNA剪接復(fù)合體的關(guān)鍵基因U2AF35、U2AF65、SRSF1、SRSF2、SF3B1、SF3A1、SF1和PRPF40B與肝癌發(fā)生風(fēng)險的關(guān)系。
　　2、分析上述基因與已報告的肝癌主要環(huán)境危險因素的交互作用對肝癌發(fā)生風(fēng)險的影響。
　　方法:采用以醫(yī)院為基礎(chǔ)的兩階段病例-對照研究方法:
　　1、篩查階段:選擇2009年5月至2012

4、年6月武漢同濟醫(yī)院首次確診的378例原發(fā)性肝癌病例和461例同期成人體檢非腫瘤對照。采用Openarray中通量分型技術(shù)在篩查樣本中對U2依賴型mRNA剪接復(fù)合體的關(guān)鍵基因U2AF35、U2AF65、SRSF1、SRSF2、SF3B1、SF3A1、SF1和PRPF40的17個潛在功能標簽單核苷酸多態(tài)性（Single nucleotide polymorphism，SNP）位點進行基因分型;基于不同遺傳模型分析上述候選SNPs與肝癌的關(guān)聯(lián)

5、性，并探討其與吸煙、飲酒以及HBV慢性感染的交互作用。
　　2、驗證階段:選擇2007年9月至2009年9月北京佑安醫(yī)院首次確診的428例原發(fā)性肝癌病例和647例同期體檢的非腫瘤對照，對篩查階段得到的陽性位點采用TaqMan實時熒光定量基因分型技術(shù)進行基因分型;同時探討基因與肝癌的關(guān)聯(lián)，以及基因與環(huán)境交互作用的影響。
　　結(jié)果:
　　1、篩查樣本中觀察到SF3A1基因的四個TagSNPs位點rs2074733、rs59

6、94293、rs7288947和rs9608886與肝癌發(fā)病風(fēng)險存在顯著關(guān)聯(lián):以攜帶rs2074733-CC基因型者為參照，攜帶rs2074733-T等位基因者的肝癌發(fā)病風(fēng)險降低，OR值為0.36(95％CI:0.25-0.53);以攜帶rs5994293-TT基因型者為參照，攜帶rs5994293-G等位基因者的肝癌發(fā)病風(fēng)險降低，OR值為0.42(95％CI:0.29-0.61);以攜帶rs7288947-CC基因型者為參照，攜帶rs

7、7288947-T等位基因者的肝癌發(fā)病風(fēng)險降低，OR值為0.54(95％CI:0.41-0.72)和以攜帶rs9608886-TT基因型者為參照，攜帶rs9608886-G等位基因者的肝癌發(fā)病風(fēng)險降低，OR值為0.17（95％CI:0.10-0.31）。
　　2、將上述四個位點在驗證樣本中進行驗證后發(fā)現(xiàn)，SF3A1基因的rs5994293位點與肝癌發(fā)病風(fēng)險仍舊存在關(guān)聯(lián)。以攜帶TT基因型者為參照，攜帶G等位基因者的肝癌發(fā)病風(fēng)險降低3

8、4％（95％CI:0.44-0.99，P=0.042），但P值經(jīng)FDR校正后無統(tǒng)計學(xué)差異。
　　3、對兩個階段樣本均發(fā)現(xiàn)存在強連鎖不平衡的SF3A1基因rs7288947-rs5994293進行單體型分析，兩個階段樣本中CG單體型均與肝癌發(fā)生風(fēng)險有關(guān)。合并樣本中以攜帶CT單體型的個體為參照，攜帶CG單體型肝癌發(fā)病風(fēng)險降低到0.67(95％CI:0.55-0.82; P=0.0001)。
　　4、環(huán)境變量單因素分析結(jié)果顯示，在

9、兩階段研究樣本中HBsAg陽性為肝癌的危險因素，合并樣本的OR值為50.70(95％CI:37.08-69.31，P=1.16E-133);吸煙在篩查階段樣本中是肝癌發(fā)病的危險因素(OR=1.65;95％ CI:1.06-2.56，P=0.027)，合并樣本中吸煙者肝癌發(fā)病風(fēng)險是非吸煙者的1.36倍（95％CI:0.99-1.87，P=0.057）。
　　5、環(huán)境-環(huán)境、基因-環(huán)境交互作用結(jié)果顯示:在兩階段研究樣本中，觀察到HBs

10、Ag與吸煙、飲酒存在加法交互作用，合并樣本中HBsAg陽性與吸煙、飲酒的加法交互協(xié)同指數(shù)SI分別為2.12(95％CI:1.59-2.65)、1.83(95％CI:1.26-2.40);在合并樣本中，觀察到HBsAg陰性者中合并吸煙飲酒和SF3A1-rs5994293 TT基因型之間存在加法交互作用，加法交互協(xié)同指數(shù)SI為2.27(95％CI:1.43-3.12)。但在HBsAg陽性者中并沒有觀察到上述加法交互作用。
　　結(jié)論:<