原發(fā)性肝癌中基因突變和變位剪接的初步研究.pdf

1、目的：研究原發(fā)性肝癌中p53基因、β-catenin基因的表達(dá)及其突變；hTERT基因、DNMT3b基因在肝癌中的表達(dá)及其變位剪接的情況；觀察這4個基因在肝癌發(fā)生發(fā)展中的作用。 方法：以我實驗室提取的RNA的反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物為實驗標(biāo)本，取其中29份經(jīng)PCR檢測P53基因、18份檢測β-catenin、38份檢測DNMT3b基因、17份檢測hTERT基因。PCR產(chǎn)物行凝膠電泳，回收后經(jīng)T-A克隆轉(zhuǎn)化測序，并行寡聚核苷酸芯片雜交，檢測這四

2、種基因的表達(dá)及突變情況。 結(jié)果：PCR結(jié)果顯示β-catenin基因在85.7％(6/7)的肝癌、100％(11/11)的癌旁組織有表達(dá)，表達(dá)強(qiáng)度在肝癌組與癌旁組無差異(p＞0.05)。p53基因在69.2％(9/13)的肝癌、81.3％(13/16)的癌旁組織中有表達(dá)，表達(dá)強(qiáng)度在兩組無差異(p＞0.05)。DNMT3b基因以四種變位剪接體(DNMT3b1、DNMT3b3、DNMT3b4、DNMT3b5)的形式表達(dá)，其總的表達(dá)率

3、為肝癌組92.3％(12/13)、癌旁組71.4％(10/14)、正常及慢性肝病組90.9％(10/11)。三組表達(dá)無統(tǒng)計學(xué)差異。其中DNMT3b1在正常及慢性肝病組中的表達(dá)高于肝癌組(p＜0.05)。DNMT3b4見于1例肝癌和1例癌旁組織，DNMT3b5見于1例肝癌組織，兩者在正常及慢性肝病組均無表達(dá)。hTERT基因以四種變位剪接體(全長轉(zhuǎn)錄體、α剪接體、β剪接體及αβ剪接體)的形式表達(dá)，總的表達(dá)率為肝癌組90％(9/10)、癌旁組

4、100％(4/4)，正常及慢性肝病組66.7％(2/3)，三組間表達(dá)無統(tǒng)計學(xué)差異。三組中，全長轉(zhuǎn)錄體在肝癌中表達(dá)率為66.7％，癌旁25％，正常及慢性肝病組0，雖無統(tǒng)計學(xué)意義，但有一個逐漸降低的趨勢。DNA測序顯示：β-catenin基因在肝癌中的突變率為0％(0/5)，癌旁組中突變率為36.4％(4/11)，兩組無統(tǒng)計學(xué)差異(p＞0.05)。突變位點(diǎn)在密碼子14、72、80。p53基因在肝癌中突變率為66.7％(4/6)，癌旁為50％

5、(5/10)，兩組相比無統(tǒng)計學(xué)差異，突變位點(diǎn)位于密碼子232、234、235、236、244、248、258、259、273、275、279、305，大部分位于p53的5個保守區(qū)。寡聚核苷酸芯片雜交結(jié)果顯示在根據(jù)文獻(xiàn)報道設(shè)計的常見的p53基因的突變位點(diǎn)均未檢測到突變型雜交信號，與測序結(jié)果一致。DNMT及hTERT基因均檢測到四種變位剪接體的雜交信號。 結(jié)論：β-catenin基因在肝癌中未見突變，是否存在其他激活Wnt途徑的機(jī)制