PTHrP在人胃粘膜ECL細(xì)胞中表達(dá)的研究.pdf

1、骨質(zhì)疏松癥是一種全身骨量減少、骨組織顯微結(jié)構(gòu)改變伴有骨脆性增高及易導(dǎo)致骨折的增齡性疾病，它與年齡、性別、飲酒、雌激素缺乏、長(zhǎng)期使用糖皮質(zhì)激素等多種因素有關(guān)。許多消化系統(tǒng)疾病如胃切除術(shù)、慢性肝病、炎癥性腸病等有較高的骨質(zhì)疏松發(fā)生率[1]，但目前對(duì)這些疾病引起骨質(zhì)疏松的機(jī)理尚不明確。 胃切除術(shù)后骨病早在50多年前就被提出。多年研究已證實(shí)，飲食中鈣、維生素D的攝入、利用減少及胃酸分泌的減少都不是導(dǎo)致胃切除術(shù)后骨量丟失的主要原因[2-3

2、]。通過對(duì)分別實(shí)行胃大部切除（GX），胃底切除（FX，切除胃的泌酸部分）和胃竇切除術(shù)（切除胃泌素產(chǎn)生部位）的實(shí)驗(yàn)對(duì)象所引起的骨量的變化程度比較時(shí)，發(fā)現(xiàn)切除胃底后能引起明顯的骨量減少[4-5]，在對(duì)其進(jìn)一步的研究中，人們認(rèn)為對(duì)骨代謝起主要作用的物質(zhì)存在于胃底泌酸粘膜中的腸嗜鉻樣細(xì)胞（enterochromaffin-like cell，ECL cell）中，ECL細(xì)胞是泌酸粘膜部分最主要的內(nèi)分泌細(xì)胞，占65-70%，富含顆粒和分泌囊泡[6

3、]，胃泌素（gastrin）是由胃竇部的G細(xì)胞分泌的一種激素，在ECL細(xì)胞成熟過程中起了重要的作用，在胃泌素的刺激下ECL細(xì)胞增生、肥大，分泌組胺、胰抑素、Reg蛋白等[7]，這種假想的物質(zhì)同樣也受胃泌素的影響，人們認(rèn)為胃泌素就是通過刺激這種假想激素的分泌來間接發(fā)揮降低血鈣濃度和刺激鈣吸收入骨的作用。人們將這種假想的物質(zhì)暫命名為胃鈣素（Gastrocalcin），胃鈣素是一種可被肽鏈端解酶所降解的并且與組胺和胰抑素?zé)o關(guān)的肽類物質(zhì)，這種激

4、素主要通過促進(jìn)三磷酸肌醇的生成而發(fā)揮升高成骨樣細(xì)胞內(nèi)鈣濃度的作用，將富含ECL細(xì)胞顆粒和分泌囊泡的胃粘膜提取物作用于3種成骨樣細(xì)胞株時(shí)，發(fā)現(xiàn)這種提取物能激活磷脂酶C并促進(jìn)三磷酸肌醇生成，進(jìn)而引起成骨樣細(xì)胞內(nèi)鈣濃度迅速增高[8-9]。 2005年，Andersson[10]等學(xué)者對(duì)大鼠的ECL細(xì)胞進(jìn)行了全基因圖譜的繪制，發(fā)現(xiàn)在受胃泌素調(diào)節(jié)的14種基因中有10種具有分泌活性，其中之一為甲狀旁腺激素相關(guān)蛋白（Parathyroid H

5、ormone-related Protein/Parathyroid Hormone-like Hormone，PTHrP或PTHLH）基因。 PTHrP是在研究惡性腫瘤引起的體液性惡性高鈣血癥機(jī)制過程中發(fā)現(xiàn)的一種多肽類物質(zhì)，目前多項(xiàng)研究已證實(shí)PTHrP可廣泛表達(dá)于體內(nèi)多種正常組織和細(xì)胞中，如循環(huán)系統(tǒng)、內(nèi)分泌細(xì)胞及平滑肌細(xì)胞中等，在機(jī)體成長(zhǎng)成熟過程中它發(fā)揮了重要的作用[11]。由于PTHrP的mRNA極不穩(wěn)定，蛋白本身也容易水

6、解，所以它主要是通過旁分泌、自分泌的方式來發(fā)揮作用[12-13]，有些研究發(fā)現(xiàn)它還可以進(jìn)入細(xì)胞核或核仁以內(nèi)在分泌的方式影響細(xì)胞功能。在大鼠的胃粘膜肌層的平滑肌層細(xì)胞中已有學(xué)者通過免疫組化和分子雜交的方法證明了PTHrP的存在，是一種潛在的胃平滑肌弛緩劑，同時(shí)在成鼠的粘膜中亦有較微弱的表達(dá)，在受膽堿能刺激和胃膨脹等外界因素刺激下通過自分泌或旁分泌的方式作用于平滑肌細(xì)胞，調(diào)節(jié)胃的收縮，但在正常生理狀況下的作用尚不明確[14-16]。目前，尚

7、未有相關(guān)的入胃粘膜中是否有PTHrP的表達(dá)的及其功能研究的報(bào)道。 PTHrP與PTH（1-34）有相似的氨基末端（N端）序列，兩者能與共同的受體PTH/PTHrP受體-1（PTHR-1）結(jié)合，通過激活細(xì)胞內(nèi)腺苷酸環(huán)化酶-環(huán)磷酸腺苷-蛋白激酶A（PKA）和磷脂酶C-胞漿鈣離子-蛋白激酶C（PKC）兩條信號(hào)傳導(dǎo)途徑發(fā)揮作用[11]，多年的實(shí)驗(yàn)和臨床研究證實(shí)PTHrP不僅與PTH有相似的結(jié)構(gòu)，還與PTH一樣有促進(jìn)骨形成的作用，與PT

8、H相比，它只選擇性刺激骨形成、促進(jìn)骨骼合成，具有起效快、副作用少等優(yōu)點(diǎn)，是一種優(yōu)于PTH的純粹的骨形成促進(jìn)劑，大劑量（超過PTH10-20倍）用藥對(duì)內(nèi)環(huán)境礦物質(zhì)的穩(wěn)定沒有不良影響[13，17-18]。給小鼠注入PTHrP后可以刺激十二指腸鈣吸收的增加，而胃泌素對(duì)十二指腸鈣的吸收并沒有作用[19-20]。 因此，基于目前對(duì)PTHrP和胃鈣素的相關(guān)研究，有學(xué)者們提出在ECL細(xì)胞中分泌的PTHrP可能就是曾經(jīng)假想的激素胃鈣素，其在調(diào)節(jié)

9、鈣吸收入骨及維持正常骨量方面發(fā)揮了重要的作用。本試驗(yàn)擬對(duì)正常人胃粘膜中PTHrP的表達(dá)、定位及可能的影響因素做一初步研究。 目的: 檢測(cè)人胃泌酸粘膜ECL細(xì)胞中是否有PTHrP的表達(dá)，及其對(duì)胃泌素和PTHrP可能的關(guān)系進(jìn)行一初步了解。 方法: 收集28例正常胃底、胃體上部粘膜，及診治前的空腹血清，其中包括7例行內(nèi)鏡檢查和21例手術(shù)切除的標(biāo)本，所有受檢者營(yíng)養(yǎng)狀況良好或僅有輕度低蛋白血癥。應(yīng)用RT-PCR和熒

10、光定量PCR方法從基因水平檢測(cè)胃泌酸粘膜中是否有PTHrP的表達(dá)及其相對(duì)表達(dá)量，通過免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)胃粘膜ECL細(xì)胞中有無PTHrP的表達(dá)。應(yīng)用ELISA方法檢測(cè)受檢者血清中PTHrP的表達(dá)水平，放射免疫法檢測(cè)其血清中的胃泌素表達(dá)量，并對(duì)血PTHrP、胃泌素及胃粘膜的PTHrP相對(duì)mRNA表達(dá)水平進(jìn)行相關(guān)關(guān)系分析。 結(jié)果: 通過RT-PCR和qPCR方法檢測(cè)到正常人胃泌酸粘膜中有PTHrP的mRNA較微弱的表達(dá)；免疫

11、組化證明了PTHrP在人胃ECL細(xì)胞中有弱陽性表達(dá)；血清中PTHrP表達(dá)量較低，與胃泌素?zé)o顯著相關(guān)關(guān)系；而胃泌素與胃粘膜中PTHrP的mRNA表達(dá)水平之間有一顯著正相關(guān)關(guān)系，相關(guān)系數(shù)r=0.569，P=0.002。 結(jié)論: PTHrP在正常人胃泌酸粘膜ECL細(xì)胞中有較微弱的表達(dá)，檢測(cè)血清PTHrP值可能并不是一條反應(yīng)胃粘膜分泌PTHrP多少的有效指標(biāo)。胃泌素和胃粘膜中PTHrP的mRNA水平之間存在一正相關(guān)關(guān)系，胃泌素