Graves病易感位點(diǎn)的篩查和功能初探.pdf

1、Graves病是一種常見(jiàn)的多基因疾病，在中國(guó)它的發(fā)病率約0.25-1.09％，是最常見(jiàn)的自身免疫疾病之一。Graves病的發(fā)生是由基因和環(huán)境因素的共同影響所造成的，可能有多個(gè)基因參與了對(duì)疾病的貢獻(xiàn)，并且環(huán)境因素在其中也起了很大的作用，因此發(fā)病機(jī)理比較復(fù)雜。通過(guò)連鎖分析，人們發(fā)現(xiàn)了許多與Graves病可能相關(guān)的染色體易感區(qū)段，其中位于5q31區(qū)段的結(jié)果同時(shí)得到了中國(guó)和日本研究小組的確認(rèn)，因此在這一區(qū)域很可能包含一個(gè)至少在東亞人群中比較特異

2、的易感位點(diǎn)。 在5q31區(qū)域Lod值最高的Marker D5S2090附近的3.0MBK區(qū)域，我們按照每100Kb選擇一個(gè)SNP的方法，尋找易感位點(diǎn)。在總共選擇的29個(gè)SNP中，有兩個(gè)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，其中rsl368408處的P值達(dá)到8.74 X 10<'-9>。接下來(lái)我們將關(guān)注的目光進(jìn)一步縮小到rsl368408附近的1.OMB區(qū)域。我們將這一區(qū)段包含的全部11個(gè)基因的外顯子和啟動(dòng)子區(qū)進(jìn)行全測(cè)序，共發(fā)現(xiàn)了52個(gè)SNP位點(diǎn)；同時(shí)對(duì)

3、于基因間的區(qū)域，按照每5KB一個(gè)SNP位點(diǎn)的原則從NCB工的dbSNP數(shù)據(jù)庫(kù)共選擇了39個(gè)SNP位點(diǎn)。將這1.0MB區(qū)域內(nèi)選擇的全部91個(gè)SNP，采用MassArray Sequenom技術(shù)，對(duì)從山東和上海地區(qū)采集的兩組人群進(jìn)行測(cè)序。通過(guò)病例對(duì)照分析，發(fā)現(xiàn)在山東人群中一共有22個(gè)SNP位點(diǎn)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，并且差異位點(diǎn)最多且統(tǒng)計(jì)學(xué)意義最明顯的位點(diǎn)都位于UGRPl基因上，其中位于啟動(dòng)子區(qū)的P2位點(diǎn)有最顯著的P值(P=1.37×10<'-8>)

4、。上海人群中雖然有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異的位點(diǎn)數(shù)目少于山東人群，但整體趨勢(shì)很相似，且統(tǒng)計(jì)學(xué)差異最顯著的位點(diǎn)也是位于UGRPl的P2位點(diǎn)。接下來(lái)，我們對(duì)兩組人群UGRPl基因的9個(gè)SNP位點(diǎn)組成的單倍型進(jìn)行了分析，結(jié)果顯示包含啟動(dòng)子區(qū)P1+P2或P1+P3兩個(gè)SNP組成的單倍型統(tǒng)計(jì)學(xué)差異最明顯。 通過(guò)構(gòu)建包含P1+P2、P1+P3單倍型以及啟動(dòng)子區(qū)不含SNP位點(diǎn)變化的正常序列的報(bào)告基因質(zhì)粒，我們通過(guò)熒光素酶試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)：相對(duì)于正常的啟動(dòng)子序列，

5、啟動(dòng)子區(qū)含有單倍型改變的UGRP基因轉(zhuǎn)錄水平明顯下降。此外我們還收集了93例正常人的甲狀腺組織，通過(guò)Real-timePCR證實(shí)了在體內(nèi)也有同樣的情況存在。Northern blot和RT-PCR試驗(yàn)顯示UGRPl基因的受體在很多免疫相關(guān)的組織都有表達(dá)，這進(jìn)一步提示我們UGRPl可能與Gralves病這種自身免疫疾病有很強(qiáng)的相關(guān)性。最后，我們還對(duì)啟動(dòng)子區(qū)含有單倍型改變以及不含SNP改變的Graves病人組織標(biāo)本做了基因芯片分析，希望對(duì)我