敗血癥及臨床常見(jiàn)細(xì)菌16S-23SrRNA基因區(qū)間的分子生物學(xué)研究.pdf

1、浙江大學(xué)博士學(xué)位論文敗血癥及臨床常見(jiàn)細(xì)菌16S23SrRNA基因區(qū)間的分子生物學(xué)研究姓名：傅君芳申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：兒科學(xué)指導(dǎo)教師：洪文瀾2000.5.1不能通過(guò)水煮裂解而擴(kuò)增。Chelex100裂解法能一步裂解所研究的菌種，擴(kuò)增條帶清晰，明亮，方法簡(jiǎn)便陜速，污染機(jī)會(huì)少經(jīng)典的酚氯仿抽提細(xì)菌DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增，需將DNA在不同的管之間轉(zhuǎn)移，步驟繁瑣，增加污染機(jī)會(huì)最終確立Chelex100裂解法為奉課題研究的細(xì)茵裂解方法。經(jīng)PCR擴(kuò)增

2、后，i3個(gè)菌種呈單一條帶，其中5種菌：產(chǎn)單核李斯特氏茵、腦膜炎敗血黃桿菌、嗜水氣單胞茵、陰溝腸桿菌、類白喉棒狀桿菌能立刻區(qū)分，2種分枝桿菌具有與其它細(xì)菌不同的特異性條帶(i800bp)，還有6種菌不能區(qū)分；8個(gè)菌種呈兩條帶，其中3種茵：肺炎鏈球菌、小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌、福氏志賀氏茵能立刻區(qū)分。但嚆氏志賀氏茵與其它呈兩條帶的5種菌條帶相近，故在第二部分中亦對(duì)它們做了RFLP分析：呈三條帶的三種菌：糞腸球菌、洋蔥假單胞菌、枯草芽孢桿菌以及呈

3、多條帶的7種菌：B一溶血鏈球菌(4條帶)、大腸埃希氏菌(4條帶)、支氣管敗血鮑特氏菌(4條帶)、醋酸鈣不動(dòng)桿菌(5條帶)，傷寒沙門氏菌(5條帶)、惡臭假單胞菌(5條帶)、痢疾志賀氏茵(7條帶)，它們的條帶分子量不同，互相之間能區(qū)分。從臨床分離的肺炎克雷伯氏菌、銅綠假單胞菌、大腸埃希氏菌等常見(jiàn)菌株共j5株，均呈現(xiàn)b標(biāo)準(zhǔn)菌株相同的DNA圖譜，表明這些條帶具有很好的重復(fù)性二葡萄球菌屬中11個(gè)不同菌種的16S23SrRNAf基因區(qū)間的研究＼萄萄

4、球菌是引起兒童敗血癥的首位致病原，文獻(xiàn)報(bào)道葡萄球菌尤以金黃色葡萄球菌具有不同的rRNA基因區(qū)間PCR圖譜，且在葡萄球菌裂解i童程中，我們發(fā)現(xiàn)用水煮法及Chlexloo法均不能擴(kuò)增葡萄球菌，因此為了研制簡(jiǎn)便有效的裂解葡萄球菌的方法及詳細(xì)了解葡萄球菌屬細(xì)菌的165—23SrRNA基因區(qū)問(wèn)的PeR圖譜，我們對(duì)葡萄球菌屬中ii個(gè)不同菌種的75株細(xì)菌進(jìn)行了研究。結(jié)果Chelexl00裂解法經(jīng)改良后，即5％Chelex緩沖液(舍003％SDS，1％