公綿羊精液品質相關基因群體遺傳效應研究.pdf

1、目前，綿羊分子標記輔助選擇技術研究已取得長足進展，但相關研究主要集中在母羊多胎性狀方面，針對公羊的研究相對較少，主要原因是公羊飼養(yǎng)數(shù)量少，難以滿足研究群體數(shù)量需要。為此,本研究以4個進口品種的288只種公羊為試驗材料，進行遺傳多態(tài)性及關聯(lián)性分析，旨在尋找與精液品質相關的分子標記，為種公羊科學利用及選育提高提供理論依據(jù)。
　?。?）選擇FSHR、LHCGR、MBL2、CD4、ID2等29個候選基因中29個主要SNP為研究對象，采用S

2、equenom MassArray飛行時間質譜法分析SNPs在四個品種公羊群體中的多態(tài)性以及與種公羊精液原精液量、精液濃度、精子活力等11項指標以及陰囊周徑等的關聯(lián)性，發(fā)現(xiàn)：
　?、僭谒x的29個SNPs中，只有5個位點在研究群體中得到確認，分別是：FSHR（rs398233545）、LHCGR（rs398733991）、MBL2(rs401909751)、CD4(rs403107881)、ID2(rs420477086)。其中前

3、4個為錯義突變，最后一個位于3′UTR區(qū)。
　　②FSHR（rs398233545）在杜泊公羊群體中未檢出。在薩?？搜?、白薩福克羊和無角道賽特羊群體中均存在兩種基因型（CC和CT型），優(yōu)勢基因型均為CC，基因型頻率分別為：0.94、0.96和0.9；優(yōu)勢等位基因均為C，基因頻率分別為0.97、0.98和0.95。PIC結果顯示FSHR（rs398233545）在四個品種羊群體中為低度多態(tài)。性狀關聯(lián)性分析發(fā)現(xiàn)，rs398233545

4、與四個品種羊的精液品質性狀均無顯著相關（P＞0.05）。
　?、跮HCGR（rs398733991）在薩福克羊群體中未檢測到。在杜泊羊和白薩?？搜蛉后w中存在CC和CT兩種基因型，在無角道賽特羊群體中存在CC、CT和TT三種基因型。優(yōu)勢基因型均為CC，基因型頻率分別為0.97、0.89和0.9；優(yōu)勢等位基因均為C，等位基因頻率分別為0.98、0.95和0.93。PIC結果顯示，rs398733991在四個品種羊群體中屬于低度多態(tài)。關

5、聯(lián)分析發(fā)現(xiàn)，在白薩福克羊群體中CT型個體鞭打頻率顯著高于CC型（0.01　　④MBL2(rs401909751)在無角道賽特群體中未檢測到。在杜泊羊、薩?？搜蚝桶姿_福克羊群體中，均檢測到GG和AA兩種基因型。在杜泊和白

6、薩福克羊群體中，優(yōu)勢基因型為GG，基因型頻率為0.98和0.82；優(yōu)勢等位基因為G，基因頻率為0.99和0.88。在薩福克群體中，優(yōu)勢基因型為AA，基因型頻率為0.62，優(yōu)勢等位基因為A，基因頻率為0.59。PIC結果顯示，rs401909751在杜泊和白薩?？巳后w中為低度多態(tài)，在薩?？巳后w中為高度多態(tài)。性狀關聯(lián)分析發(fā)現(xiàn)，薩福克AA基因型的原精液量顯著高于GG型(P<0.05)；在白薩福克群體中，AA型的鞭打頻率和移動角度顯著高于GG型

7、(P<0.05)。在杜泊和無角道賽特中，不發(fā)現(xiàn)顯著相關關系。
　?、軨D4(rs403107881)在杜泊、薩福克、白薩?？撕蜔o角道賽特羊群體中均發(fā)現(xiàn)GG、GA和AA三種基因型；優(yōu)勢基因型均為GG，基因型頻率分別為0.96、0.51、0.8和0.42；優(yōu)勢等位基因均為G，等位基因頻率分別為0.98、0.73、0.84和0.57。PIC結果顯示，rs403107881在杜泊群體中為低度多態(tài)，在薩?？?、白薩?？撕蜔o角道賽特群體中為中度

8、多態(tài)。性狀關聯(lián)分析發(fā)現(xiàn)，在薩?？巳后w中AA基因型個體的陰囊周徑顯著大于AG型(P<0.05)；在白薩?？巳后w中，GG型的線性度、移動角度和前向性顯著高于AG型(P<0.05)，AG型的精液濃度顯著高于GG型(P<0.05)。在無角道賽特群體中，AG型的精液量和精液濃度顯著高于GG型(P<0.05)。
　?、轎D2(rs420477086)在杜泊、薩福克、白薩福克和無角道賽特群體均存在CC、CT和TT三種基因型。其中，杜泊和薩福克的

9、優(yōu)勢基因型均為CC型，基因型頻率分別為0.44和0.55；優(yōu)勢等位基因為C，等位基因頻率分別為0.66和0.71。在白薩?？撕蜔o角道賽特群體中，優(yōu)勢基因型為CT，基因型頻率分別為0.54和0.62；優(yōu)勢等位基因為T，等位基因頻率分別為0.54和0.5。PIC，四個品種均為中度多態(tài)。關聯(lián)分析顯示，杜泊CC型個體的精液濃度顯著高于CT型(P<0.05)；白薩福克CT和TT型個體的頂體完整率顯著高于CC型個體(P<0.05)。在薩福克和無角道

10、賽特群體中，未發(fā)現(xiàn)與精液品質的顯著相關性。
　　⑦單倍體型分析，發(fā)現(xiàn)在兩種單倍體型C-C-G-G-C和C-C-G-G-T存在可能性最大；證實rs398233545和rs420477086可作為單倍體型的標簽SNP。關聯(lián)分析表明，C-C-G-A-C單倍體型與精液量減少和精子活力降低有關；C-C-A-G-C單倍體型可致精子平均路徑速度降低。
　?。?）測定種公羊血清7個重要生化指標（Ca、P、Mg、GLU、UREA、AST、AL

11、T），分析與精液品質性狀的相關性，主要結果為：
　?、偎膫€品種公羊血清生化指標中杜泊羊的血清Mg含量顯著低于其他三個品種。
　?、陉P聯(lián)分析發(fā)現(xiàn)，血清中鈣的含量與LIN和STR呈顯著的負相關（r=-0.203,P=0.022；r=-0.197,P=0.026）；血清磷與MAD呈顯著負相關（r=-0.2020.P=0.022）；血清鎂與精子活力呈極顯著負相關（r=-0.234,P=0.004）；血清鎂含量與VAP和ALH呈顯著正

12、相關。血清中AST的含量與精子活力呈顯著負相關（r=-0.21,P=0.009<0.01）。
　　綜上所述，首次對公綿羊FSHR（rs398233545）、LHCGR（rs398733991）、MBL2(rs401909751)、CD4(rs403107881)、ID2(rs420477086)的群體遺傳效應進行分析。rs398233545與種公羊精液品質性狀無關；而rs398733991、rs401909751、rs403107