Toll樣受體在新生兒感染時(shí)的變化及臨床意義.pdf

1、新生兒免疫應(yīng)答反應(yīng)比較弱，易合并感染。Toll樣受體可誘導(dǎo)非特異性免疫應(yīng)答，介導(dǎo)特異性免疫反應(yīng)，在抗感染免疫中發(fā)揮重要作用。本文探討單個(gè)核細(xì)胞Toll樣受體2、3、4mRNA、MD一2mRNA和MyD88mRNA，以及單核細(xì)胞／中性粒細(xì)胞表面TLR2、TLR4蛋白和陽(yáng)性細(xì)胞百分比在新生兒感染時(shí)的變化，分析它們?cè)谛律鷥嚎垢腥久庖咧械淖饔煤团R床意義。同時(shí)觀察中性粒細(xì)胞表面CD64表達(dá)，對(duì)TLR與CD64進(jìn)行相關(guān)性分析，探討他們?cè)谠\斷新生兒感

2、染中的作用。 方法:收集200例不同胎齡(26—43周)新生兒外周血，分為敗血癥組(21例)、細(xì)菌性肺炎組(70例)、細(xì)菌性腦膜炎組(17例)、尿路感染組(38例)、先天性梅毒組(¨例)和非感染組(43例)。采用熒光定量PCR法測(cè)定TLR2、3、4、MD-2和MyD88mRNA水平，應(yīng)用流式細(xì)胞儀分析外周血單核細(xì)胞和中性粒細(xì)胞表面TLR2和TLR4蛋白及陽(yáng)性細(xì)胞百分比水平。應(yīng)用流式細(xì)胞儀定量檢測(cè)其中120例感染和非感染新生兒外周

3、血中性粒細(xì)胞表面CD64分子表達(dá)，并與CRP、WBC計(jì)數(shù)及血培養(yǎng)進(jìn)行比較，評(píng)價(jià)它們對(duì)診斷新生兒感染的臨床價(jià)值，同時(shí)對(duì)CD64與TLR做相關(guān)性分析。 結(jié)果: 1．157例感染新生兒中，早產(chǎn)兒94例，足月兒63例。新生兒感染臨床癥狀不典型，主要表現(xiàn)為血氧飽和度下降、發(fā)熱或體溫不升、呼吸暫停、血小板減少、高膽紅素血癥、喂養(yǎng)不耐受(吃奶少或胃儲(chǔ)留)等。21例敗血癥患兒血培養(yǎng)全部陽(yáng)性，主要為凝固酶陰性葡萄球菌；肺部感染70例，呼吸

4、道分泌物培養(yǎng)陽(yáng)性36例，主要為肺炎克雷伯菌；尿路感染38例，清潔中段尿培養(yǎng)陽(yáng)性16例，主要為肺炎克雷伯菌：腦膜炎組17例，腦脊液培養(yǎng)陽(yáng)性共2例，均為大腸桿菌。 2．在非感染組新生兒，TLR2、3、4在mRNA、蛋白表達(dá)和陽(yáng)性細(xì)胞百分比水平與胎齡均無(wú)明顯相關(guān)性。 3．TLR2mRNA在敗血癥組明顯增加(6．14±0．80)，在G+菌敗血癥組表達(dá)最為顯著(6．43±O．74)，細(xì)菌性肺炎組(5．49±0．62)、細(xì)菌性腦膜炎

5、組(5．61±O．60)和先天性梅毒組(5．89±0．38)也顯著增加。單核細(xì)胞表面TLR2蛋白表達(dá)在敗血癥組最高，為1．94±0．52，G+菌敗血癥表達(dá)為2．54±0．68，G～菌敗血癥表達(dá)為1．25±0．51，兩者比較P

6、．80±0．31，兩者比較P

7、染組與非感染組之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，感染組TLR4陽(yáng)性細(xì)胞百分比為(0．71±0．31)％，高于非感染組(O．29±0．36)％。中性粒細(xì)胞TLR4蛋白表達(dá)在敗血癥組最高，為3．25±1．25，在G+菌敗血癥表達(dá)為2．97±1．48，G一菌敗血癥為3．75±1．0l，兩者比較P

8、癥組表達(dá)最高，G+菌敗血癥組表達(dá)為5．43±L19，G一菌敗血癥組表達(dá)為5．76±1．17，兩者比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=O．594，P=O．56)，細(xì)菌性腦膜炎組、尿路感染組MD-2mRNA顯著增高。MyD88mRNA在新生兒敗血癥組表達(dá)最高5．7l±0．94，MyD88mRNA在G+菌敗血癥組表達(dá)為5．92±1．0l，在G一菌敗血癥組表達(dá)為5．79±0．85，兩者比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=0．793，P=O．86)，MyD88mRN

9、A在新生兒各感染組均顯著增高。在敗血癥組，TLR2mRNA與MD-2mRNA相關(guān)系數(shù)為O．415，P=O．0¨；在肺炎組的相關(guān)系數(shù)為0．38，P--O．04。新生兒感染組TLR4mRNA與MD一2mRNA成正相關(guān)(R=O．39，P=O)，敗血癥組，TLR4mRNA與MD一2mRNA相關(guān)系數(shù)為O．442，P=O．021；腦膜炎組TLR4mRNA與MD-2mRNA相關(guān)系數(shù)為0．913，P=O．004；尿路感染組相關(guān)系數(shù)為0．21，P=O．0

10、45。TLR2mRNA與MyD88mRNA相關(guān)性顯著(R=O．956，P=O．00)。TLR4mRNA與MyD88mRNA相關(guān)性顯著(R=O．997，P=0.00)。TLR3mRNA與MD-2和MyD88mRNA均無(wú)明顯相關(guān)性。 7．G+菌敗血癥組TLR2mRNA(6．43±0．74)表達(dá)顯著高于TLR4mRNA(5．39±O．78)(t=1．56，P=0．024)，G一菌敗血癥組TLR4mRNA(6．78±0．79)表達(dá)顯著高

11、于TLR2mRNA(5．64±O．68)(t=2．63，P=0．0¨)。敗血癥組單核細(xì)胞TLR2蛋白表達(dá)顯著高于TLR4表達(dá)，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=1.00，P=0．044)。TLR4陽(yáng)性細(xì)胞百分比均顯著低于TLR2陽(yáng)性細(xì)胞百分比，P

12、表達(dá)為7845．25±1790．07M／U，顯著高于局部感染組4003．86±1790．07M／U(P=0.00)：通過(guò)繪制ROC曲線確定CD64陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)為≥3000M／U。新生兒敗血癥組，CD64檢測(cè)陽(yáng)性率為91％，靈敏度為92％，明顯高于血培養(yǎng)及CRP。敗血癥組和其他感染組TLR2和TLR4蛋白表達(dá)與CD64相關(guān)性分析，在敗血癥組TLR2和TLR4與CD64有顯著相關(guān)性，通過(guò)TLR2和TLR4可區(qū)分G+和G一菌感染，但CD64不能。

13、 結(jié)論:新生兒感染時(shí)不同免疫細(xì)胞TLR2mRNA／蛋白和TLR4mRNA／蛋白表達(dá)顯著增高，特別是在嚴(yán)重感染敗血癥組。TLR2主要在G+菌感染增高，TLR4主要在G一菌感染增高。TLR2和4表達(dá)與MD-2和MyD88有相關(guān)性，提示TLR2和TLR4及信號(hào)傳導(dǎo)途徑均參與新生兒抗感染免疫機(jī)制。新生兒感染時(shí)中性粒細(xì)胞CD64表達(dá)明顯增高，可望成為診斷新生感染的指標(biāo)，中性粒細(xì)胞表面TLR與CD64有顯著相關(guān)性。這些結(jié)果為進(jìn)一步深入了解新