Toll樣受體4在結(jié)腸癌中的表達(dá)及臨床意義.pdf

1、目的：結(jié)腸癌是世界上最常見的消化道腫瘤之一，嚴(yán)重威脅著人類的健康，在我國發(fā)病率也非常高，但其免疫機(jī)制仍不十分清楚[1]。近年來，隨著對(duì)腫瘤免疫機(jī)制的更為深入的研究，人們已認(rèn)識(shí)到除了特異性免疫外非特異性免疫在腫瘤免疫中亦占有重要地位，尤其是在腫瘤免疫監(jiān)視的過程中。新近研究發(fā)現(xiàn)Toll樣受體(Toll-likereceptors，TLRs)是參與非特異性免疫的一類重要分子，也是連接非特異性免疫和特異性免疫的重要橋梁[2、3]。TLRs不僅能

2、識(shí)別病原相關(guān)分子模式配體(Pathogenassociatedmolecularpatterns，PAMPs)還能識(shí)別并結(jié)合機(jī)體自身產(chǎn)生的如熱休克蛋白、壞死細(xì)胞釋放的核苷酸和DNA[4、5、6]等內(nèi)源性分子即內(nèi)源性配體。而腫瘤在發(fā)生、發(fā)展過程中就可以這樣產(chǎn)生一些能被TLRs所識(shí)別的內(nèi)源性配體，并且可通過TLRs的信號(hào)傳導(dǎo)，誘導(dǎo)T細(xì)胞向Th1型分化并產(chǎn)生IL-2、IFN-γ、TNF-α等因子，從而產(chǎn)生抗腫瘤免疫反應(yīng)。TLRs多表達(dá)于樹突狀

3、細(xì)胞(DC)等抗原遞呈細(xì)胞(APC)，主要識(shí)別脂多糖等病原體保守結(jié)構(gòu)。TLRs在結(jié)合配體后，通過MyD88(Myeloiddifferentiationfactor88)-核因子κB等多條信號(hào)傳導(dǎo)途徑，啟動(dòng)細(xì)胞活化進(jìn)程，上調(diào)主要組織相容性復(fù)合物和CD80、CD86等共刺激分子的表達(dá)，分泌腫瘤壞死因子(TNF)、白細(xì)胞介素-6(IL-6)等細(xì)胞因子[8、9]。由于TLRs可調(diào)控APC的活化，并直接參與抗原的內(nèi)化及向CD4+T細(xì)胞呈遞，因此

4、是連接非特異性免疫和特異性免疫的重要橋梁。近來發(fā)現(xiàn)，TLRs除了識(shí)別病原體的保守結(jié)構(gòu)，也可以識(shí)別機(jī)體在應(yīng)激、損傷和細(xì)胞非凋亡性死亡等情況下產(chǎn)生的一些內(nèi)源性分子。熱休克蛋白60(HSP60)就是第一個(gè)被發(fā)現(xiàn)的TLRs的內(nèi)源性配體[10、11]。此后又相繼發(fā)現(xiàn)了HSP70、HSP90、GP96等HSP家族成員也可為TLR4和(或)TLR2所識(shí)別，并促進(jìn)DC成熟，產(chǎn)生前炎癥因子(proinflammatoryfactors)，誘導(dǎo)免疫反應(yīng)。而

5、腫瘤細(xì)胞內(nèi)含有豐富的HSP70和GP96，在腫瘤細(xì)胞壞死后，這些內(nèi)源性配體被TLRs所識(shí)別，從而引起抗腫瘤免疫反應(yīng)。因此TLRs在腫瘤免疫監(jiān)視過程中起著重要的作用。本課題主要研究TLR4與結(jié)腸癌的免疫監(jiān)視的相關(guān)性，進(jìn)一步證實(shí)TLRs在腫瘤免疫監(jiān)視中所起的重要作用，為腫瘤免疫佐劑的研究開辟一個(gè)新的方向，從而為腫瘤的生物治療提供更為有價(jià)值的理論依據(jù)。 方法：本研究所采用研究44例結(jié)腸癌組織標(biāo)本系河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院腫瘤外科手術(shù)切除的

6、結(jié)腸癌組織經(jīng)包埋后所制的蠟塊，術(shù)后均被病理證實(shí)為結(jié)腸腺癌，臨床資料完整。其中男性24例，女性20例，年齡32-72歲，中位數(shù)年齡47歲。臨床病理按照Dukes分期，A期12例，B期13例，C期10例，D期9例。按病理分級(jí)，高中分化者25例，低未分化者19例。所有患者術(shù)前均未接受放療、化療和激素免疫治療。對(duì)照組10例，為術(shù)中切除的正常結(jié)腸粘膜。用華東理工大學(xué)免疫組織化學(xué)軟件于20倍自動(dòng)分析光學(xué)顯微鏡下檢測(cè)TLR4在結(jié)腸癌的表達(dá)情況。TLR

7、4是否陽性表達(dá)以陽性細(xì)胞面積比率(％)來衡量。統(tǒng)計(jì)學(xué)處理使用SPSS11.0軟件，結(jié)腸癌不同的臨床Dukes分期之間采用X2檢驗(yàn)；結(jié)腸癌細(xì)胞高中分化組和低未分化組之間采用四格表法X2檢驗(yàn)。P＜0.05視為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果：按照Dukes分期結(jié)腸癌A期、B期、C期、D期各組之間比較，TLR4蛋白的陽性表達(dá)率具有顯著性差異，P＜0.05，且TLR4蛋白的陽性表達(dá)率隨著結(jié)腸癌臨床Dukes分期的進(jìn)展而升高，并都高于對(duì)照組，而對(duì)照組

8、幾乎不表達(dá)TLR4蛋白。在結(jié)腸癌組織不同病理分期中TLR4蛋白亦有不同程度的表達(dá)，按結(jié)腸癌細(xì)胞高中分化組及低未分化組之間的比較，TLR4蛋白的陽性表達(dá)率具有顯著性差異，P＜0.05，且TLR4蛋白陽性表達(dá)率隨著結(jié)腸癌細(xì)胞分化程度的降低反而升高，并且都高于對(duì)照組。 結(jié)論：結(jié)腸癌組織Dukes分期不同，TLR4蛋白則有不同程度的表達(dá)，分期越高，TLR4蛋白的表達(dá)越多，而正常的結(jié)腸組織幾乎不表達(dá)TLR4蛋白；此外，結(jié)腸癌細(xì)胞病理分化程

9、度不同，TLR4蛋白的表達(dá)程度也不同，隨著癌細(xì)胞分化程度的減低、細(xì)胞惡性度的增加，TLR4蛋白的表達(dá)程度反而升高。這兩點(diǎn)都提示，隨著癌組織的增大、浸潤深度的擴(kuò)大、癌細(xì)胞惡性程度的增加(分化程度的減低)，其在細(xì)胞凋亡或壞死后釋放的可被TLR4蛋白結(jié)合的內(nèi)源性配體也逐漸增加，導(dǎo)致TLR4蛋白的表達(dá)水平逐步升高。這可以作為判斷結(jié)腸癌進(jìn)展程度的一個(gè)參考指標(biāo)，即TLR4在結(jié)腸癌的發(fā)生、發(fā)展中起一個(gè)免疫監(jiān)視者的作用。對(duì)此，那些可增強(qiáng)TLRs信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)