腺病毒介導(dǎo)的小鼠內(nèi)皮抑素基因治療G422膠質(zhì)母細(xì)胞瘤的實(shí)驗(yàn).pdf

1、一、重組腺病毒的制備及其對(duì)腫瘤細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)的作用目的:制備高濃度、高純度攜有小鼠內(nèi)皮抑素基因的重組腺病毒,測(cè)定該病毒體外對(duì)效應(yīng)細(xì)胞的轉(zhuǎn)染率,明確轉(zhuǎn)染后腫瘤細(xì)胞能夠表達(dá)內(nèi)皮抑素,觀察攜有目的基因的重組腺病毒轉(zhuǎn)染后對(duì)腫瘤細(xì)胞及內(nèi)皮細(xì)胞體外培養(yǎng)時(shí)生物學(xué)特性變化.結(jié)論:該實(shí)驗(yàn)重組腺病毒經(jīng)擴(kuò)增、純化和濃縮后,Ad-mEnd病毒滴度為5×1010pfu/ml,在MOI=100時(shí),病毒對(duì)G422的轉(zhuǎn)染率大于90﹪;重組腺病毒攜帶的內(nèi)皮抑素基因經(jīng)

2、RT-PCR,Western-blot等檢測(cè),證實(shí)得到有效表達(dá);攜有內(nèi)皮抑素基因的重組腺病毒轉(zhuǎn)染可抑制內(nèi)皮細(xì)胞增殖,促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞凋亡,而對(duì)G422細(xì)胞沒(méi)有影響,為下一步體內(nèi)實(shí)驗(yàn)打下基礎(chǔ).二、基因治療荷瘤小鼠膠質(zhì)母細(xì)胞瘤體內(nèi)轉(zhuǎn)染率測(cè)定目的:測(cè)量基因治療用腺病毒在荷瘤鼠腫瘤體內(nèi)的轉(zhuǎn)染率,明確該基因治療最佳病毒注射劑量和病毒注射方法.結(jié)論:病毒注射量、注射方法和時(shí)間三個(gè)因素共同決定該腺病毒的體內(nèi)轉(zhuǎn)染率,轉(zhuǎn)染率與各組間不存在有一階和二階的交互作

3、用,實(shí)驗(yàn)提示當(dāng)注射病毒量為MOI=250,腫瘤局部分多點(diǎn)(4以上)注射用藥,在病毒注射后第7天,檢測(cè)到的體內(nèi)轉(zhuǎn)染率最高,可大于45﹪,同時(shí)也是基因治療的最佳方法.三、Ad-mEnd基因治療小鼠膠質(zhì)母細(xì)胞瘤抑制血管生成的實(shí)驗(yàn)研究目的:通過(guò)接種轉(zhuǎn)染有Ad-mEnd基因的G422細(xì)胞,觀察小鼠皮下成瘤的時(shí)間和成瘤比率;明確荷瘤小鼠瘤體直接注射Ad-mEnd后對(duì)膠質(zhì)瘤血管生成和腫瘤生長(zhǎng)的抑制效果,分析其中的作用機(jī)制.結(jié)論:用Ad-mEnd轉(zhuǎn)染的

4、G422小鼠膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞接種后,能延長(zhǎng)腫瘤成瘤時(shí)間,減少腫瘤成瘤比率,早期可顯著抑制腫瘤體積生長(zhǎng).腫瘤局部注射重組腺病毒介導(dǎo)的內(nèi)皮抑素基因在小鼠G442瘤體內(nèi)能得到良好表達(dá),多次分點(diǎn)注射可提高內(nèi)皮抑素的表達(dá)量,增加治療效果;重組腺病毒介導(dǎo)的內(nèi)皮抑素基因治療可以抑制小鼠G442腫瘤生長(zhǎng),提高荷瘤小鼠生存率,延長(zhǎng)生存時(shí)間,并可以使部分腫瘤處于長(zhǎng)期休眠狀態(tài),荷瘤小鼠長(zhǎng)期生存;內(nèi)皮抑素基因有效治療小鼠G442膠質(zhì)母細(xì)胞瘤,與內(nèi)皮抑素誘發(fā)內(nèi)皮