肝康顆粒體外抗病毒及免疫調(diào)節(jié)作用研究.pdf

1、目的:本實驗旨在觀察中藥復方劑肝康顆粒體外抗乙型肝炎病毒和免疫調(diào)節(jié)作用,為后續(xù)深入研究診斷(剖心)作用機制包括制劑工藝的優(yōu)化奠定基礎。(要領)
　　 方法:制備肝康顆粒,利用HepG2.2.15細胞模型,采用MTT法和細胞凋亡染色實驗來檢測肝康顆粒的細胞毒性,并觀察其量-效關系;通過酶聯(lián)免疫吸附測定法(ELISA)檢測乙肝病毒HBV中HBsAg和HBeAg的表達,并用熒光定量PCR技術定量分析HBV DNA的復制濃度;通過測定巨

2、噬細胞吞噬功能和血清溶血素水平進行免疫調(diào)節(jié)功能研究。
　　 結果:MTT法檢測結果發(fā)現(xiàn)隨著濃度和時間的增加,對HepG2.2.15細胞生長活性影響增強。ELISA法測定}iBV分泌到上清液中HBsAg和HBeAg的含量,濃度越大抑制作用越強,并且隨著作用時間的累加抑制效果相應增強。在第3、6、9天,GKGL降低HBsAg和HBeAg的治療指數(shù)TI均大于2,顯示藥物低毒高效,具有很好的安全性。實時熒光定量PCR法檢測發(fā)現(xiàn),與對照組

3、相比較,肝康顆粒作用3、6、9、12天后,均可使細胞上清液中HBV DNA的拷貝數(shù)降低(P＜0.05、P＜0.01),且呈現(xiàn)明顯的量效和時效關系。小鼠尾靜脈注射BCG和LPS后,小鼠血清轉(zhuǎn)氨酶顯著升高,臟器指數(shù)增大,表明造模成功。不同劑量的GKGL給藥組小鼠血清AST、ALT水平降低,臟器損傷不同程度減輕,對免疫性肝損傷有一定的保護作用。巨噬細胞吞噬功能的測定結果顯示,高、中劑量肝康顆粒對小鼠腹腔巨噬細胞吞噬功能在一定程度上有明顯增強作