感毒清顆粒抗病毒作用及機(jī)制研究.pdf

1、目的：考察感毒清顆粒體內(nèi)、外抗流感病毒作用，并考察其對(duì)干擾素的誘生作用及Toll樣受體信號(hào)通路的影響。
　　方法:1.建立流感病毒A/四川/SWL/2009（H1N1）感染小鼠病毒性肺炎模型，考察感毒清顆粒對(duì)動(dòng)物的死亡保護(hù)作用，并檢測(cè)第3天和第6天的肺指數(shù)、肺病理形態(tài)學(xué)及肺組織病毒滴度的影響，評(píng)價(jià)感毒清顆粒體內(nèi)的抗流感病毒效應(yīng)。2.建立流感病毒（流感病毒 A/四川/SWL/2009（H1N1），流感病毒 A/福建同安/196/20

2、09（H3N2），流感病毒 B/重慶渝中/1384/2009，流感病毒 B/四川安岳/139/2011）感染MDCK細(xì)胞模型，采用細(xì)胞病變法（CPE）測(cè)定TCID50，考察感毒清顆粒的體外抗病毒作用。3.建立流感病毒性肺炎模型，分別于第3天和第6天無(wú)菌取肺組織，采用ELISA法檢測(cè)肺組織勻漿中IFN-α、IFN-β、IFN-γ的含量。采用Western Blot法測(cè)定Toll樣受體信號(hào)通路關(guān)鍵靶點(diǎn)TLR3、TLR7、TLR8、TLR9、

3、TRAF6、IRF3、IRF7、IRF8、c-Jun、NF-κB蛋白表達(dá)。
　　結(jié)果：1.感毒清顆粒可提高流感肺炎模型小鼠的存活率，延長(zhǎng)存活時(shí)間，減輕或逆轉(zhuǎn)由于病毒感染引起的體重下降，降低動(dòng)物發(fā)病率和發(fā)病嚴(yán)重程度。同時(shí)可降低模型動(dòng)物感染后第3和6天的肺指數(shù)、肺組織炎癥和肺組織纖維化程度，延緩病程發(fā)展，并降低感染動(dòng)物的肺病毒載量和病毒復(fù)制速率，且具有劑量相關(guān)性2. CPE測(cè)定流感病毒 A/四川/SWL/2009（H1N1），流感病毒

4、 A/福建同安/196/2009（H3N2），流感病毒 B/重慶渝中/1384/2009，流感病毒 B/四川安岳/139/2011對(duì)MDCK的TCID50的log值分別為7.07，8.07，5.91，6.41，感毒清顆粒水溶液對(duì)MDCK細(xì)胞的TC0為530μg/ml。最高無(wú)毒濃度的感毒清顆粒水溶液對(duì)流感病毒 A/四川/SWL/2009（H1N1）、流感病毒 A/福建同安/196/2009（H3N2），流感病毒 B/重慶渝中/1384/2

5、009都無(wú)抑制活性，口服感毒清顆粒小鼠血清與對(duì)照小鼠血清無(wú)差異。3.病毒感染第3天和第6天，Toll樣受體信號(hào)通路中TLR3、TLR7、TLR8受體含量顯著高于空白組，有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），而TLR9、IRF8與空白組無(wú)差異，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。TRAF6、IRF3、IRF7、c-Jun和NF-κB p65受體蛋白表達(dá)量均顯著高于空白組（P<0.05），說(shuō)明病毒激活了 Toll樣受體信號(hào)通路。各給藥組樣本與安慰劑組

6、相比，第3天樣本的 IFN-β含量都顯著高于安慰劑組，感毒清顆粒中劑量組 IFN-α含量高于安慰劑組，IFN-γ無(wú)統(tǒng)計(jì)意義。感毒清顆粒組第3天和第6天 TLR3、TLR7、TLR8、TRAF6、IRF3、c-Jun和NF-κB p65受體蛋白表達(dá)量均顯著低于模型對(duì)照組，有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），并呈一定的劑量依賴關(guān)系。
　　結(jié)論：感毒清顆粒體內(nèi)具有明顯抗病毒效果；體外無(wú)明顯抗病毒作用；抗病毒作用與早期誘生內(nèi)源性IFN-α，