論文一：肽鏈延伸因子的表達特征;論文二：脂代謝相關基因突變小鼠肝臟差異表達蛋白研究.pdf

1、肽鏈延長因子(Peptideelongationfactors，eEF1A)是蛋白質(zhì)生物合成過程中不可缺少的特異蛋白質(zhì)因子，具有調(diào)節(jié)蛋白合成及促發(fā)凋亡等多種作用。本文的前期工作顯示，eEF1A-1的異構體eEF1A-2具有在神經(jīng)元和肌細胞發(fā)育中替代前者表達的特征。eEF1A-2基因突變小鼠有神經(jīng)、肌肉和免疫系統(tǒng)發(fā)育異常，并于4周齡死亡，提示eEF1A-2和eEF1A-1有類似生物學功能，且eEF1A-2對出生后的小鼠神經(jīng)、肌肉系統(tǒng)的發(fā)育

2、、成熟起重要作用。為了分析兩種蛋白在不同發(fā)育階段的小鼠大腦神經(jīng)細胞中的原位分布及表達特點，以探討其與終末分化細胞生理功能維持的關系，本文應用Westernblot檢測和組織免疫熒光技術，對兩基因型小鼠進行了比較研究，得出以下結論： 在野生型小鼠神經(jīng)細胞中，隨著發(fā)育進展eEF1A-2蛋白的表達水平逐漸升高，并在出生后26天，完全取代了eEF1A-1的表達。突變型(eEF1A-2-/-)小鼠完全缺失eEF1A-2的表達并在出生后第2

3、1d出現(xiàn)頭部振顫、肌肉萎縮、體重減輕以及多臟器發(fā)育不全，且均在發(fā)育到28d時死亡。突變型(eEF1A-2-/-)小鼠神經(jīng)元中eEF1A-1的時空表達特點基本與野生型小鼠一致，該小鼠盡管缺失eEF1A-2基因，但神經(jīng)元中eEF1A-1的表達水平和時相未受影響，表明此種組織特異性的調(diào)節(jié)開關的功能不受eEF1A-2是否表達以及其表達水平的影響，說明體內(nèi)存在不依賴于eEF1A-2的eEF1A-1表達調(diào)控機制。eEF1A-2基因突變小鼠神經(jīng)和肌肉

4、組織功能異常的發(fā)生時期與eEF1A-1蛋白表達明顯下降的時期相吻合，提示eEF1As在維持相關組織的蛋白合成等多種生物學功能中的重要性。 動脈粥樣硬化(atherosclerosis,AS)是一種慢性病理變化過程，其發(fā)生發(fā)展與多基因異常以及遺傳因素與環(huán)境因素的相互作用有關。深入研究AS關鍵基因、易感基因等重要遺傳因素之間的相互作用機理以及環(huán)境因素對AS的影響，有助于進一步闡明AS的發(fā)生機制，為AS的預防和治療提供有益的理論依據(jù)與

5、研究平臺。目前對AS發(fā)病機制的研究重點已從單基因、單因素向多基因、多因素方向發(fā)展。本實驗室首次成功建立了三基因突變(apoE-/-/LDLR-/-/Leprdb/db)小鼠模型，并從遺傳因素和環(huán)境因素(高脂高膽固醇飲食)入手，對該小鼠的生物學特征、發(fā)生AS的病理生理特點以及AS發(fā)生機制進行了分子生物學和分子病理學研究。在前期研究結果的基礎上，本論文探討了肝臟中重要差異蛋白表達的變化規(guī)律，并且分析了上述變化與AS發(fā)生發(fā)展的關系，得出以下結

6、果： 本實驗運用雙向電泳聯(lián)合質(zhì)譜鑒定的蛋白質(zhì)組學分析手段，比較了幼齡ALO、AL小鼠與WT小鼠肝臟蛋白質(zhì)表達譜特點。5w齡普通飲食組ALO、AL和WT小鼠的肝臟中分別平均檢測到841±57、928±15和1017±50個蛋白點(n=3)，以其中一張WT圖譜為參考，其余WT、AL、ALO圖譜的平均匹配點數(shù)為846±22個(n=2)，773±16個(n=3)和706±29個(n=3)，平均匹配率分別為83.2％，78.7％和71.9

7、％。與WT小鼠相比，ALO小鼠有140個蛋白點未匹配，相差5倍以上的上調(diào)點和下調(diào)點分別為7個和39個；AL小鼠有108個蛋白點未匹配，相差5倍以上的上調(diào)點和下調(diào)點分別為10個和45個。選取其中差異較明顯的6個蛋白點進行LTQ-ESI質(zhì)譜分析，鑒定出endoplasminprecursor,acidicleucin-richnuclearphosphoprotein32familymemberA，serotransferrinprecur

8、sor,elongationfactor-2homolog，fructosebisphosphatase1，fibronectinprecursor,complementC3precursor,ComplementC4precursor,fibrinogenBbetapolypeptide，fibrinogen,gammapolypeptide10種蛋白質(zhì)，主要參與了脂質(zhì)和糖類代謝、動脈內(nèi)膜損傷、免疫炎癥反應等AS的病理過程，推測這些蛋