新西蘭兔與SD大鼠EAE模型的比較及PG490在EAE中作用機(jī)制研究.pdf

1、多發(fā)性硬化(MS)是中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)炎癥性脫髓鞘疾病，具有復(fù)發(fā)，遷延和致殘高的特性。實(shí)驗(yàn)性變態(tài)反應(yīng)性腦脊髓炎(EAE)的臨床表現(xiàn)及組織病理學(xué)改變與多發(fā)性硬化極為相似，被公認(rèn)為研究多發(fā)性硬化的經(jīng)典模型。EAE模型的制作方法很多，文獻(xiàn)也報(bào)道了使用不同種屬的動(dòng)物的研究，但普遍是使用不同品系的大鼠來(lái)研究。由于動(dòng)物的種類和品系，免疫原的成份等因素不同，EAE模型的發(fā)病率、病程、病情和病理改變程度等均有差異，故而使不同研究結(jié)果的可比性受到影響

2、。本研究制備了不同種屬動(dòng)物EAE模型并比較其各自的特點(diǎn)，以便為以后研究MS者根據(jù)各自的實(shí)驗(yàn)?zāi)康膩?lái)選擇合適的模型做參考及提供不同動(dòng)物EAE模型的制作方法。 PG490是一種二萜環(huán)氧化物，是雷公藤內(nèi)酯醇的有效提取劑，具有獨(dú)特的抗炎和免疫抑制的效果，不僅抑制細(xì)胞因子的增殖活化，還可以使活化的T淋巴細(xì)胞發(fā)生凋亡，阻止進(jìn)一步增殖。它可選擇性地作用于p65亞基而抑制NF-kB的活性。與其他藥物不同，PG490不抑制活化的NF-kB與DNA的

3、結(jié)合，而是在NF-kB與DNA結(jié)合之后仍然可以抑制靶基因的轉(zhuǎn)錄，實(shí)驗(yàn)證明它通過(guò)抑制p65的轉(zhuǎn)錄激活域而發(fā)揮作用。劉浩等研究發(fā)現(xiàn)PG490可以降低培養(yǎng)狀況下的且Jurkat細(xì)胞中NF-kB的活力，并以激活狀況下更為顯著。PG490直接應(yīng)用于EAE模型的在體研究未見報(bào)道。 目的：觀察PG490在EAE模型中的作用并探討其作用機(jī)制。 材料與方法： 1、新西蘭兔和SD大鼠實(shí)驗(yàn)性變態(tài)反應(yīng)性腦脊髓炎(EAE)模型的建立及鑒定

4、. 2、NF-kB選擇性拮抗劑PG490的作用及其作用途徑的相關(guān)研究：本部分實(shí)驗(yàn)隨機(jī)選取SD大鼠48只并建立EAE模型：將所有動(dòng)物分為三組并給予PG490干預(yù)：EAE模型對(duì)照組(16只)：誘導(dǎo)EAE模型，每日2ml生理鹽水注射。治療組a(16只)：誘導(dǎo)的EAE模型從發(fā)病時(shí)(即首次發(fā)病時(shí))PG490(0.2m g/kg/d)腹腔注射治療5天。治療組b(16只)：誘導(dǎo)的EAE模型從發(fā)病復(fù)發(fā)期(再次發(fā)病時(shí))PG490(0.2m g/k

5、 g/d)腹腔注射治療5天。對(duì)各實(shí)驗(yàn)組動(dòng)物分別進(jìn)行臨床評(píng)分，病理觀察和組織評(píng)分，應(yīng)用熒光免疫及免疫組織化學(xué)的方法觀察各實(shí)驗(yàn)組動(dòng)物腦組織中NF-kBp65及COX-2的表達(dá)，應(yīng)用ELISA方法測(cè)定各實(shí)驗(yàn)組動(dòng)物腦組織中NF-k Bp65活性，trkA含量和外周血清IFN-γ的含量。 結(jié)論： 1、不同種屬動(dòng)物EAE模型有各自不同的特點(diǎn)及優(yōu)點(diǎn)：新西蘭兔EAE模型價(jià)格貴但更適用影像學(xué)方面的研究；SD大鼠．EAE模型具有典型的MS臨

6、床發(fā)病過(guò)程，癥狀穩(wěn)定，價(jià)格較便宜，適合藥物干預(yù)方面的研究。 2、NF-k Bp65的激活參與了SD大鼠EAE模型的發(fā)病過(guò)程，它的激活可以調(diào)控下游炎性介質(zhì)的釋放從而介導(dǎo)髓鞘的脫失，是EAE免疫炎性反應(yīng)的關(guān)鍵途徑。 3、PG490在SD大鼠EAE模型首次發(fā)病期及復(fù)發(fā)期均可改善EAE模型的臨床癥狀，其作用機(jī)制分別是： ①在首次發(fā)病期，PG490可能主要是通過(guò)調(diào)控免疫炎性反應(yīng)通路中上游NF-k Bp65激活達(dá)到抑制免疫炎