離體人真皮成纖維細(xì)胞熱損傷變性后轉(zhuǎn)歸及HSP90的保護(hù)作用.pdf

1、目的：探討體外培養(yǎng)的成纖維細(xì)胞(Fibroblast FB)熱損傷變性后形態(tài)，功能的變化規(guī)律及HSP90的表達(dá)。 方法：采用體外組織細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)培養(yǎng)離體人真皮成纖維細(xì)胞，選擇52℃浴水加熱30S作為實(shí)驗(yàn)組，37℃30S為對(duì)照組，于3h，6h，12h,24h,36h,48h,72h,96h，120h,168h，240h等不同時(shí)相點(diǎn)分別采用MTT法，倒置顯微鏡，透射電鏡，流式細(xì)胞儀，反向高效液相儀，乳酸脫氫酶(Lactic Acid

2、 Dehydrogenase，LDH)試劑盒，Na+-K+-ATP酶試劑盒， I型膠原和堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(FGF2)ELASA Kit,RT-PCR，免疫熒光及Western blot等技術(shù)對(duì)上述兩組細(xì)胞的存活，形態(tài)，細(xì)胞膜通透性，Na+-K+-ATP酶，F(xiàn)GF2的分泌，I型膠原的轉(zhuǎn)錄，分泌及HSP90的合成等進(jìn)行檢測(cè)。 結(jié)果：實(shí)驗(yàn)組成纖維細(xì)胞生存率為50％，顯著低于對(duì)照組(P<0.05)，電鏡顯示實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞3h細(xì)胞膜，線

3、粒體，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)有明顯損傷，透明樣物，髓鞘樣物增多，24h達(dá)到頂峰，細(xì)胞核形態(tài)始終未見明顯異常，72h(3天)后成纖維細(xì)胞開始逐漸恢復(fù)，168h(7天)細(xì)胞形態(tài)基本恢復(fù)正常。流式細(xì)胞儀提示細(xì)胞滯留S期(S為21.13％)，明顯高于對(duì)照組(S為14.29％，P<0.01)；實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞凋亡率(3.59％)也明顯高于對(duì)照組(0.12％)(P<0.01)。實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞3h細(xì)胞膜LDH漏出率為1057.90±243.61U/L，顯著高于對(duì)照組646.0

4、8±248.98 U/L(P<0.05)，24hLDH漏出率達(dá)到高峰(實(shí)驗(yàn)組：1493.88±80.723 U/L，對(duì)照組：62150+_228.82 U/L，P<0.01)，72h后基本恢復(fù)正常。實(shí)驗(yàn)組胞膜中3h Nal+-K+-ATP酶的活性為1.40 ±0.04U/L，低于對(duì)照組1.49±0.04U/L(P<0.05，為正常活性的95.3‰)，24h實(shí)驗(yàn)組Na+-K+-ATP酶的活性為0.30±0.02 U/L，低于對(duì)照組0.49

5、-20.06 U/L(P<0.05，為正?；钚缘?1.2‰)，48h后基本恢復(fù)正常。實(shí)驗(yàn)組3h細(xì)胞線粒體ATP量為345439.4_±33954.24μg/ml，低于對(duì)照組435416.4±23613.2μg/ml(實(shí)驗(yàn)組ATP量為對(duì)照組的79‰，P<0.05)，24h實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞線粒體ATP量進(jìn)一步降低為94731.00_±1082.12μg/ml，明顯低于對(duì)照組215604.2±20610.17μg/ml(實(shí)驗(yàn)組ATP量為對(duì)照組的43

6、.94‰，P<0.05)。實(shí)驗(yàn)組24h，168h，240h的細(xì)胞外FGF2量與對(duì)照組無差異(P>0.05)，48h，72h，96 h，120 h比對(duì)照組低(P<0.05)且它們之間相對(duì)穩(wěn)定(P>0.05).24h，72h，120 h，168h，240h實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞I型膠原的轉(zhuǎn)錄，分泌與對(duì)照組無差別(P>0.05)。用免疫熒光觀察到FB熱損傷后24h胞漿，胞核中HSP90高表達(dá)。Western blot顯示3h即有HSP90表達(dá)量升高，24