肥大細(xì)胞脫顆粒與早期腸缺血再灌注損傷的關(guān)系研究.pdf

1、中山大學(xué)碩士學(xué)位論文肥大細(xì)胞脫顆粒與早期腸缺血再灌注損傷的關(guān)系研究姓名：劉德昭申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：麻醉學(xué)指導(dǎo)教師：黑子清20100503中山大學(xué)碩士學(xué)位論文肥大細(xì)胞脫顆粒與早期腸缺血再灌注損傷的關(guān)系研究我們以往研究發(fā)現(xiàn)，通過干預(yù)肥大脫顆粒能夠改變腸缺血再灌注損傷大鼠長期存活率。但由于檢測的組織是動(dòng)物恢復(fù)期，因此，與死亡有關(guān)的原因我們?nèi)圆磺宄?。本研究將通過復(fù)制大鼠腸缺血再灌注損傷的早期動(dòng)物模型，研究抑制和促進(jìn)肥大細(xì)胞脫顆粒對(duì)腸缺血再灌

2、注過程中腸損傷的影響，并從氧化損傷、細(xì)胞因子和NO等途徑探討肥大細(xì)胞脫顆粒與早期腸缺血再灌注損傷的關(guān)系。資料與方法1儀器與試劑Heidolphx900勻漿機(jī)(德國)，離心沉淀機(jī)(BeckmanAuegra64R，美國)，酶標(biāo)儀(BioRadModel680，美國)。試劑：色甘酸鈉(ICN，美國)，Compound48／80(Sigma：美國)，酮替芬(Sigma；美國)，魚精蛋白(上海信宜)；大鼠肥大細(xì)胞免疫組化試劑盒(ThermoFi

3、sherScientific公司，美國)；組織蛋白濃度測定試劑盒(南京凱基公司)；大鼠組胺試劑盒(R&D公司，美國)，大鼠TNFa試劑盒(R&D公司，美國)，MDA、SOD、NO試劑盒(南京凱基生物科技發(fā)展有限公司)；其它為國產(chǎn)為國產(chǎn)分析純?cè)噭?實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與分組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物是廣東省中山大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供的48只清潔級(jí)SD大鼠，體重范圍為180—2709，雌雄各半。按基礎(chǔ)飼料飼養(yǎng)l周，室溫2527(2，適應(yīng)環(huán)境后，按體重隨機(jī)分為6組，每組8

4、只。即：S組(假手術(shù)組)、M組(模型組)、C組(模型色甘酸鈉25mg／kg)、CP組(模型Compound48／80075mg／kg)、P組(即類胰蛋白酶抑制劑組，模型魚精蛋白25mg／kg)、K組(模型酮替芬lmg／kg)。3動(dòng)物模型建立6組大鼠均于術(shù)前16h禁食，自由飲水。腹腔注射10％水合氯醛35ml／kg麻醉后，仰臥位固定，消毒鋪巾，腹部正中切口進(jìn)腹，分離腸系膜上動(dòng)脈。S組只分離腸系膜上動(dòng)脈，不阻斷：M、C、CP、P、K組用無損

5、傷動(dòng)脈夾夾閉腸系膜上動(dòng)脈根部，75min后松開動(dòng)脈夾(我們?cè)谇捌趯?shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)腸系膜上動(dòng)脈阻斷75min術(shù)后七天的死亡率為416％)。模型復(fù)制成功的標(biāo)準(zhǔn)為缺血處腸系膜微動(dòng)脈搏動(dòng)消失：且再灌注前腸道淤黑、腫脹；動(dòng)脈夾松開后缺血處腸系膜微動(dòng)脈恢復(fù)搏動(dòng)。C、CP組分別在再灌注前5rain經(jīng)尾靜脈注射色甘酸鈉25mg／kg和Compound48／80075mg／kg；P、K組分別在再灌注前5min經(jīng)尾靜脈注射魚精蛋白25mg／kg和酮替芬lmg／k