鼠IFN-λ2重組腺病毒載體體內(nèi)抗肺癌活性研究.pdf

1、目的:觀察本實(shí)驗(yàn)組構(gòu)建的鼠IFN-λ2(mIFN-λ2)重組腺病毒載體(Ad-mIFN-λ2)感染小鼠后能否成功表達(dá),并通過(guò)重組腺病毒載體Ad-mIFN-λ2感染至LA795肺腺癌細(xì)胞荷瘤鼠內(nèi),研究mIFN-λ2對(duì)LA795荷瘤鼠腫瘤細(xì)胞增殖的影響及其誘導(dǎo)凋亡、激活機(jī)體免疫反應(yīng)的機(jī)制。
　　 方法:采用已構(gòu)建成功的重組腺病毒載體Ad-mIFN-λ2感染至小鼠體內(nèi),采用Westernblot檢測(cè)mIFN-λ2基因在小鼠組織內(nèi)的表達(dá)

2、情況,通過(guò)小鼠的體重增長(zhǎng)情況觀察其對(duì)小鼠生長(zhǎng)的影響;進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)將Ad-mIFN-λ2感染至小鼠肺腺癌細(xì)胞LA795的荷瘤鼠內(nèi),通過(guò)繪制腫瘤生長(zhǎng)曲線觀察腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)速度,21天后處死小鼠,取小鼠瘤體、脾臟、骨胳肌等組織,HE染色顯微鏡下觀察小鼠瘤體組織、脾臟組織內(nèi)的病理改變,采用RT-PCR檢測(cè)小鼠骨骼肌組織及腫瘤組織內(nèi)mIFN-λ2的基因表達(dá),Westernblot檢測(cè)小鼠腫瘤組織mIFN-λ2的蛋白表達(dá),Tunel凋亡檢測(cè)試劑盒檢測(cè)

3、小鼠腫瘤組織的細(xì)胞凋亡,流式細(xì)胞檢測(cè)術(shù)檢測(cè)小鼠脾臟免疫細(xì)胞NK細(xì)胞、CD4+細(xì)胞、CD8+細(xì)胞的改變。
　　 結(jié)果:小鼠感染Ad-mIFN-λ2后在蛋白水平上mIFN-λ2表達(dá)量明顯高于對(duì)照組,且小鼠生長(zhǎng)基本正常:進(jìn)一步的腫瘤體內(nèi)實(shí)驗(yàn)研究,腫瘤生長(zhǎng)曲線示:PBS組感染后14d、21d與Lacz組無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,前兩者與Ad-mIFN-λ2組相比有明顯差異(p＜0.01),且Ad-mIFN-λ2組小鼠瘤體組織中央呈囊樣改變,脾臟

4、增大,病理檢查顯示此組腫瘤壞死增多,脾臟中多核巨細(xì)胞增多,白髓增寬;RT-PCR結(jié)果:Ad-mIFN-λ2感染組骨骼肌組織及腫瘤組織出現(xiàn)明顯約220bp的mIFN-λ2基因的條帶;Westernblot示Ad-mIFN-λ2組出現(xiàn)明顯27kDa的mIFN-λ2蛋白的條帶;Tunel凋亡檢測(cè)提示Ad-mIFN-λ2組凋亡明顯高于PBS組與Lacz組(p＜0.001),流式細(xì)胞檢測(cè)示:Ad-mIFN-λ2組NK、CD8+、CD4+細(xì)胞數(shù)明顯