MAPK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑在蜜蜂毒誘致的炎癥與疼痛中的作用機(jī)制研究.pdf

1、研究背景：外周組織損傷所致的炎癥既伴隨有疼痛的產(chǎn)生(持續(xù)性自發(fā)痛、痛敏及觸痛等)同時(shí)又有明顯的紅、腫、熱等炎癥反應(yīng)。我們以往的研究發(fā)現(xiàn)，大鼠后足底中心皮下注射蜜蜂毒溶液不僅能產(chǎn)生明顯的持續(xù)自發(fā)痛反應(yīng)、熱及機(jī)械性痛敏反應(yīng)<'[1-5]>，而且在注射部位有明顯的紅腫等炎癥發(fā)應(yīng)<'[1-5]>。已有大量的研究表明MAP(mitogen-activated proteinkinase)與疼痛及炎癥的發(fā)生有關(guān)，且ERK1/2和P38在組織和神經(jīng)損

2、傷誘致的疼痛和熱及機(jī)械痛敏中的作用各不相同。 目的：通過觀察周圍局部預(yù)先給予ERK1/2、P3 8和MEK的抑制劑對(duì)皮下注射蜜蜂毒誘致的持續(xù)自發(fā)疼痛反應(yīng)、機(jī)械性痛敏以及炎癥反應(yīng)，用以探討MAPK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑在蜜蜂毒誘致的炎癥與疼痛中的作用機(jī)制。這些研究可能為臨床炎性疼痛治療提供新的理論資料和思路。 材料和方法：應(yīng)用蜜蜂毒(bee venom，BV)作為化學(xué)致痛劑皮下注射模型來研究MAPK在大鼠的自發(fā)痛反應(yīng)、機(jī)械痛敏和炎癥

3、反應(yīng)中的作用。實(shí)驗(yàn)采用雄性SD大鼠，體重250～300克。分別預(yù)先10分鐘給予大鼠一側(cè)后肢足底皮下注射不同劑量的ERK1/2抑制劑PD98059，P38抑制劑SB202190和MEK1/2抑制劑U0126，其后注射側(cè)后肢足底皮下注射蜜蜂毒(0.2mg/50 1)。而對(duì)照組皆注射PD98059，SB202190和U0126的溶媒(50ul/只，DMSO：PBS=3：7)。同時(shí)為了排除藥物的全身效應(yīng)，分別提前10分鐘在蜜蜂毒注射的對(duì)側(cè)皮下注

4、射相應(yīng)的較高劑量的PD98059(100ug)，SB202190(100ug/50μl)幣口U0126(10ug/50μl)。觀察大鼠在蜜蜂毒注射后1個(gè)小時(shí)內(nèi)自發(fā)痛行為(縮足反射)，每5分鐘為一個(gè)計(jì)時(shí)點(diǎn)。蜜蜂毒注射前及注射后2小時(shí)用von-Frey機(jī)械刺激器纖維檢測注射側(cè)鼠爪機(jī)械刺激反應(yīng)閾值(paw withdrawal mechanicalthreshold，PWMT)以及應(yīng)用YLS-7A足趾容積測量儀測量注射前及蜜蜂毒注射后3小時(shí)注

5、射側(cè)鼠爪的體積。 結(jié)果： (1)對(duì)自發(fā)痛的影響：同側(cè)及對(duì)側(cè)SB202190處理組：對(duì)蜜蜂毒誘致的自發(fā)縮足反射無任何影響；同側(cè)PD98059處理組：對(duì)蜜蜂毒誘致的自發(fā)縮足反射有明顯的抑制作用，且在后期(26-60 min)更加明顯，無明顯劑量依賴性，對(duì)側(cè)PD98059處理組：對(duì)蜜蜂毒誘致的自發(fā)縮足反射無影響；同側(cè)UO126處理組：在早期及晚期低劑量的U0126對(duì)自發(fā)縮足反射皆有易化作用，中等劑量1ug對(duì)自發(fā)縮足反射無影響，

6、高劑量10ug對(duì)自發(fā)縮足反射在早期無影響，在晚期有明顯抑制作用，對(duì)側(cè)U0126處理組：對(duì)蜜蜂毒誘致的自發(fā)縮-足反射無影響。 (2)對(duì)痛敏的影響：同側(cè)及對(duì)側(cè)PD98059處理組：對(duì)蜜蜂毒誘致的機(jī)械性刺激閾值的下降則無任何影響；同側(cè)SB202190處理組：蜜蜂毒誘致的機(jī)械性刺激閾值的下降發(fā)生翻轉(zhuǎn)，各個(gè)劑量之間無明顯差異即無明顯劑量依賴，而對(duì)側(cè)SB202190處理對(duì)蜜蜂毒誘致的機(jī)械性刺激閾值的下降則無任何影響；同側(cè)及對(duì)側(cè)U0126處理

7、對(duì)蜜蜂毒誘致的機(jī)械性刺激閾值的下降無任何影響。 (3)對(duì)炎癥的影響：同側(cè)或?qū)?cè)PD98059處理組：對(duì)由蜜蜂毒引起的鼠爪體積增加無明顯影響；同側(cè)SB202190處理組：高劑量(100ug)時(shí)能夠明顯抑制蜜蜂毒注射所引起的鼠爪體積的增加，而低劑量(1ug和10ug)及對(duì)側(cè)SB202190處理組：對(duì)由蜜蜂毒引起的鼠爪體積增加無明顯影響；同側(cè)或?qū)?cè)U0126處理組：對(duì)由蜜蜂毒引起的鼠爪體積增加無明顯影響。 結(jié)論： (1

8、)MEK1/2-MAPK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑介導(dǎo)蜜蜂毒誘致的持續(xù)自發(fā)縮足行為，且其表達(dá)水平的高低對(duì)蜜蜂毒誘致的持續(xù)自發(fā)縮足行為有關(guān)：一定水平的MEK1/2表達(dá)可能抑制而不是易化蜜蜂毒誘致的自發(fā)痛行為，而高水平的MEK1/2表達(dá)可能促進(jìn)蜜蜂毒誘致的自發(fā)痛行為。P38-MAPK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑不參與介導(dǎo)蜜蜂毒誘致的持續(xù)自發(fā)痛行為。ERK1/2-MAPK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑參與蜜蜂毒誘致的持續(xù)自發(fā)縮足反射。 (2)外周P38-MAPK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑參與蜜蜂