熱性、寒性中藥對大鼠肝全基因表達(dá)譜影響的研究.pdf

1、目的:本研究旨在利用基因芯片技術(shù)探討熱性中藥附子、干姜,寒性中藥黃連、大黃對大鼠肝全基因表達(dá)譜的影響,以期從全基因組水平解析熱性及寒性中藥藥性作用機制,探討寒熱中藥屬性界定的可能依據(jù)和中藥藥性理論研究的思路與方法。
　　方法:SPF級Wistar雄性大鼠,50只,隨機分為附子組、干姜組、黃連組、大黃組和空白對照組,各中藥組分別灌胃附子水煎濃縮液1ml(含生藥0.675g)/100g,干姜水煎濃縮液1ml(含生藥0.405g)/10

2、0g,黃連水煎濃縮液1ml(含生藥0.225g)/100g,大黃水煎濃縮液1ml(含生藥1.35g)/100g,對照組予等容量生理鹽水。1次/日,連續(xù)給藥20天。給藥20天后,提取肝組織總RNA,應(yīng)用Illumina公司RatRef-12基因芯片檢測各組大鼠肝臟基因表達(dá),篩選差異表達(dá)基因,進(jìn)行基因聚類分析和功能分類注釋。并選擇部分差異基因進(jìn)行熒光實時定量PCR實驗驗證芯片結(jié)果的準(zhǔn)確性。
　　結(jié)果:附子組與正常組比較有592條基因差

3、異表達(dá),按照GeneOntology(GO)分類標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行基因功能注釋,查詢到48項顯著性基因功能,主要涉及代謝過程、催化活性、免疫反應(yīng)、磷酸鹽運輸?shù)?個GO功能亞類,代謝過程為最顯著性基因功能亞類。干姜組與正常組比較有1189條基因差異表達(dá),查詢到98項顯著性基因功能,主要涉及代謝過程、免疫反應(yīng)、催化活性、結(jié)合活性等8個GO功能亞類,代謝過程為最顯著性基因功能亞類。附子、干姜熱性中藥組與正常組比較篩選出337條共同差異基因,查詢到60項

4、顯著性基因功能,主要涉及代謝過程、免疫反應(yīng)、催化活性、離子轉(zhuǎn)運等7個GO功能亞類,代謝過程為最顯著性基因功能亞類。黃連組與正常組比較有399條基因差異表達(dá),查詢到44項顯著性基因功能,主要涉及防御反應(yīng)、趨化、代謝過程、免疫反應(yīng)等7個GO功能亞類,防御反應(yīng)為最顯著性基因功能亞類。大黃組與正常組比較有398條基因差異表達(dá),查詢到32項顯著性基因功能,主要涉及免疫系統(tǒng)過程、代謝過程、防御反應(yīng)、催化活性等6個GO功能亞類,免疫過程、代謝過程為較

5、顯著性基因功能亞類。黃連、大黃寒性中藥組與正常組比較有141條共同差異表達(dá)基因,查詢到13項顯著性基因功能,主要涉及鐵離子結(jié)合、有機酸代謝和應(yīng)答外部刺激3個GO功能亞類。
　　結(jié)論:熱性中藥可通過調(diào)控機體代謝及催化活性相關(guān)基因的表達(dá),影響糖、脂類和氨基酸代謝過程,促進(jìn)生物體內(nèi)能量的產(chǎn)生、貯存和利用;通過調(diào)控免疫相關(guān)基因的表達(dá),發(fā)揮一定的免疫調(diào)節(jié)作用,這可能是溫?zé)嵝灾兴帯皽仃柹⒑?、臨床用于寒證治療的主要分子機制,可以作為熱性中藥藥