5-氟胞嘧啶熱化療對鼠結(jié)腸癌肝轉(zhuǎn)移治療機理研究.pdf

1、腫瘤自殺基因治療又稱藥物敏感基因療法、分子化療或病毒介導的酶解前藥療法(VDEPT)，其原理是將一些病毒或細菌基因組中前藥轉(zhuǎn)換酶基因(也叫自殺基因)導入腫瘤細胞，該基因編碼特殊的酶，可將原先對哺乳動物細胞無毒性的前藥在腫瘤細胞中代謝為毒性產(chǎn)物，從而引起這些細胞自殺；而在結(jié)腸癌肝轉(zhuǎn)移自殺基因治療中最長用的是胞嘧啶脫氨酶(CD)基因，可以將無化療作用的5-氟胞嘧啶(5-FC)轉(zhuǎn)化為5-氟尿嘧啶(5-FU)，從而殺死結(jié)腸癌細胞，大量細胞實驗已

2、經(jīng)證明CD/5-FC系統(tǒng)的作用，而且聯(lián)合溫熱療法效果更加明顯；但單純CD基因表達無靶向性，我們將由癌胚抗原(CEA)啟動子(TRS)驅(qū)動表達胞嘧啶脫氨酶(CD)基因的逆轉(zhuǎn)錄病毒載體(G1CEACDNa)導入結(jié)腸癌細胞，在TRS的作用下CD基因只在CEA陽性的結(jié)腸細胞中表達，而正常組織細胞CEA為陰性，CD基因不會表達，從而避免了正常組織受5-FU的化療損傷，提高了基因治療的靶向性，前期細胞實驗也證實了轉(zhuǎn)染G1CEACDNa的結(jié)腸癌LoV

3、o細胞比轉(zhuǎn)染CD基因的LoVo細胞對5-FC的敏感性提高了19倍；在本次實驗中，我們用成功轉(zhuǎn)染G1CEACDNa的結(jié)腸癌LoVo細胞(LoVo-CEACD)建立結(jié)腸癌肝轉(zhuǎn)移模型，用5-FC腹腔熱化療來探討組織特異性胞嘧啶脫氨酶/5-氟胞嘧啶(CD/5-FC)系統(tǒng)對裸鼠結(jié)腸癌肝轉(zhuǎn)移的治療作用，通過靶向基因治療和熱療來提高5-FC化療的效果，為結(jié)腸癌肝轉(zhuǎn)移自殺基因治療提供新的途徑。 我們將質(zhì)粒G1CEACDNa在感受態(tài)細菌中大量擴增

4、，脂質(zhì)體法轉(zhuǎn)染結(jié)腸癌LoVo細胞，以含G418的RPMI1640培養(yǎng)液篩選培養(yǎng)并擴增，RT-PCR檢測目的基因穩(wěn)定表達；將15只裸鼠隨機分為三組，每組5只，分別用門靜脈注射法，脾臟注射法和肝臟注射法建立結(jié)腸癌肝轉(zhuǎn)移模型，每只裸鼠注射非轉(zhuǎn)基LoVo細胞1×107個，21天后處死裸鼠觀察肝轉(zhuǎn)移情況，發(fā)現(xiàn)門靜脈注射法建立肝轉(zhuǎn)移模型簡便，有效；再將60只裸鼠隨機分為對照組、單純熱療組、5-FC熱療組和單純5-FC化療組，每組15只，用成功轉(zhuǎn)染質(zhì)

5、粒G1CEACDNa的LoVo細胞門靜脈注射法建立結(jié)腸癌肝轉(zhuǎn)移動物模型，每只裸鼠注射1×107個細胞，同時對照組腹腔注射生理鹽水，單純熱療組腹腔注射43℃生理鹽水，5-FC熱療組腹腔注射43℃5-FC，單純5-FC化療組腹腔注射不加熱5-FC，注射劑量均為500mg/kg.d，連續(xù)21天，處死裸鼠觀察各組裸小鼠，5-FC熱療組結(jié)腸癌肝轉(zhuǎn)移率和都比較少；普通病理可見對照組腫瘤組織中，腫瘤細胞生長活躍，并可見細胞核分裂相和瘤巨細胞；而單純熱

6、療組和單純5-FC化療組腫瘤組織中，瘤細胞數(shù)減少，腫瘤細胞空泡變性，細胞核皺縮，邊集甚至消失，特別是在5-FC熱療組腫瘤組織標本中更加明顯，僅殘留少量腫瘤細胞，并可見散在的成纖維細胞，淋巴細胞和嗜酸性粒細胞；透射電鏡下可見對照組，單純熱療組和單純5-FC化療組腫瘤組織腫瘤細胞呈不規(guī)則形，體積較大，核大，核仁明顯，核分裂相易見，細胞漿內(nèi)細胞器豐富，但無明顯的凋亡小體；5-FC熱療組大量腫瘤細胞呈胞體凝縮，胞質(zhì)濃縮，核糖體及線粒體聚集，細胞

7、核固縮，核碎裂等表現(xiàn)，并可見大量有完整細胞膜包裹的凋亡小體，各組腫瘤標本中均有CD基因的表達。 本研究得到如下結(jié)論： 1.脂質(zhì)體能成功將質(zhì)粒G1CEACDNa轉(zhuǎn)染入結(jié)腸癌LoVo細胞，并且能穩(wěn)定整合持續(xù)表達。 2.熱療聯(lián)合組織特異性胞嘧啶脫氨酶/5-氟胞嘧啶(CD/5-FC)系統(tǒng)腹腔化療能明顯減少裸鼠結(jié)腸癌肝轉(zhuǎn)移瘤發(fā)生率。 3.門靜脈注射法更為有效的建立裸鼠結(jié)腸癌肝轉(zhuǎn)移模型。 4.結(jié)腸癌肝臟轉(zhuǎn)移瘤