雷公藤甲素對(duì)IFN-γ刺激后人眼球后成纖維細(xì)胞的影響.pdf

1、目的 觀察具有免疫抑制和抗炎作用的中藥雷公藤主要活性成份--雷公藤甲素對(duì)體外培養(yǎng)的人眼球后成纖維細(xì)胞(retroocular fibroblasts,RFs)的增殖、外源性細(xì)胞因子--重組人γ-干擾素(I FN-γ)刺激后RFs表達(dá)細(xì)胞粘附分子-1(Intercellular adhesion molecule-1,I CAM-1)、人類(lèi)白細(xì)胞抗原(Human leucoctye antigen,HLA)-DR(HLA-DR)、CD40

2、以及透明質(zhì)酸(hyaluronic acid,HA)、Ⅰ型膠原蛋白合成的影響.方法1.RFs的培養(yǎng)與鑒定.眼球后結(jié)締組織取自正常人,取材后立即送實(shí)驗(yàn)室并無(wú)菌條件下對(duì)組織進(jìn)行體外培養(yǎng),實(shí)驗(yàn)所用細(xì)胞在2~8代間.采用倒置相差顯微鏡和免疫細(xì)胞化學(xué)染色對(duì)培養(yǎng)的細(xì)胞進(jìn)行鑒定.2.RFs與不同濃度的雷公藤甲素(0-100μg/L)共同孵育48小時(shí)后,MTT法檢測(cè)雷公藤甲素對(duì)RFs的增殖的影響.3.RFs與外源性細(xì)胞因子--重組人IFN-γ(100U

3、/mL)以及不同濃度的雷公藤甲素(0-10μg/L)共同孵育4 8小時(shí)后,放射性免疫法和免疫細(xì)胞化學(xué)染色檢測(cè)IFN-γ和雷公藤甲素對(duì)透明質(zhì)酸和Ⅰ型膠原蛋白合成的影響.4.RFs與IFN-γ(100U/mL)以及不同濃度的雷公藤甲素(0-10μ g/L)共同孵育48小時(shí)后,流式細(xì)胞儀檢測(cè)IFN-γ對(duì)RFs表達(dá)ICAM-1、HLA-DR和CD4 0狀況的影響,以及雷公藤甲素干預(yù)后的表達(dá)情況.結(jié)果1.培養(yǎng)的細(xì)胞形態(tài)上呈成纖維原細(xì)胞型,且表達(dá)纖

4、維原細(xì)胞的標(biāo)記波形蛋白,同時(shí)不表達(dá)細(xì)胞角蛋白,提示培養(yǎng)的細(xì)胞內(nèi)為純凈的纖維原細(xì)胞.2.雷公藤甲素對(duì)RFs的增殖有明顯抑制作用,并隨劑量增大而抑制作用加強(qiáng),當(dāng)雷公藤甲素劑量增至100 μ g/L時(shí),RFs的增殖受到完全抑制.3.外源性細(xì)胞因子IFN-γ刺激后,能夠顯著刺激透明質(zhì)酸和膠原蛋白的合成、分泌,而雷公藤甲素干預(yù)后,透明質(zhì)酸和膠原蛋白的分泌合成受到明顯的抑制.4.IFN-γ能顯著誘導(dǎo)RFs過(guò)度表達(dá)ICAM-1、HLA-DR、CD40