過表達(dá)細(xì)胞間粘附分子-1間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)實(shí)驗(yàn)性自身免疫性甲狀腺炎干預(yù)作用及其機(jī)制的初步研究.pdf

1、研究目的:
　　1.探討實(shí)驗(yàn)室前期獲得的過表達(dá)細(xì)胞間粘附分子-1(Intercellular adhesionmolecules1，ICAM-1)的間充質(zhì)干細(xì)胞系 C3H10T1/2(C3H10T1/2-MIGR1-ICAM-1/MSCs)的免疫功能;
　　2.采用豬甲狀腺球蛋白(Porcine Thyrogiobulin，pTg)與弗氏佐劑(Freund'sadjuvant)免疫C57BL/6小鼠，建立實(shí)驗(yàn)性自身免疫性甲狀

2、腺炎(experimentalautoimmune thyroiditis，EAT)小鼠模型;
　　3.探討C3H10T1/2-MIGR1-ICAM-1/MSCs對(duì)EAT小鼠的干預(yù)作用及作用機(jī)制。
　　研究方法:
　　1.體外采用淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)(Lymphocyte transformation test，LTT)及混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)(Mixed lymphocyte reaction，MLR)，測(cè)定cpm值，檢測(cè)C3

3、H10T1/2-MIGR1-ICAM-1/MSCs的免疫學(xué)功能;
　　2.采用PTg及FA乳化后免疫6周齡雌性C57BL/6小鼠，并在實(shí)驗(yàn)第14天加強(qiáng)免疫一次，誘導(dǎo)EAT模型形成。實(shí)驗(yàn)第28天眼球取血，檢測(cè)血清中自身抗體水平;分離甲狀腺組織，進(jìn)行HE染色。
　　3.在成功建立小鼠EAT模型的基礎(chǔ)上，在建模早期即給予間充質(zhì)干細(xì)胞(Mesenchymal Stem Cells，MSCs)進(jìn)行干預(yù)。實(shí)驗(yàn)分為正常對(duì)照組、單純模型組、

4、C57BL/6小鼠骨實(shí)質(zhì)來源MSCs(B-MSCs)干預(yù)組、C3H10T1/2MSCs干預(yù)組、C3H10T1/2-MIGR1/MSCs干預(yù)組及C3H10T1/2-MIGR1-ICAM-1/MSCs干預(yù)組。在建模同時(shí)，分別于實(shí)驗(yàn)第0、7、14、21天對(duì)各MSCs治療組小鼠尾靜脈分別給與對(duì)應(yīng)MSCs干預(yù)，正常對(duì)照組和單純模型組小鼠均于同一時(shí)間給予等量生理鹽水作為對(duì)照。所有小鼠均于實(shí)驗(yàn)第28天眼球取血，收集各組血清及脾臟，分別用于測(cè)定各組血清

5、中TT3、TT4、自身抗體水平及炎性因子基因的表達(dá)量;分離甲狀腺組織，進(jìn)行HE染色。
　　研究結(jié)果:
　　1.體外LTT及MLR實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，B-MSCs、C3H10T1/2/MSCs、C3H10T1/2-MIGR1/MSCs及C3H10T1/2-MIGR1-ICAM-1/MSCs均具有抑制T淋巴細(xì)胞增殖的作用，其中C3H10T1/2-MIGR1-ICAM-1/MSCs的抑制作用最為明顯。
　　2.與正常對(duì)照組相比，單

6、純模型組小鼠甲狀腺組織可見甲狀腺濾泡破壞以及炎癥細(xì)胞浸潤，血清中自身抗體水平顯著升高，且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示成功建立EAT小鼠模型。
　　3.應(yīng)用不同種類MSCs對(duì)各組小鼠進(jìn)行干預(yù)后，結(jié)果表明，與單純模型組相比，各MSCs干預(yù)組小鼠甲狀腺組織濾泡破壞程度和炎癥細(xì)胞浸潤程度均減輕，其中C3H10T1/2-MIGR1-ICAM-1/MSC干預(yù)組減輕程度最為明顯;與單純模型組比較，各MSCs干預(yù)組自身抗體水平、脾細(xì)胞中IFN-γ、IL-

7、1β基因表達(dá)量均明顯升高，而IL-10基因表達(dá)量卻降低;與其他3組MSCs干預(yù)組相比，C3H10T1/2-MIGR1-ICAM-1/MSC干預(yù)組三種自身抗體水平、IFN-γ、IL-1β基因表達(dá)量下降及IL-10增高程度均最為明顯。
　　研究結(jié)論:
　　1.體外LTT及MLR均表明，C3H10T1/2-MIGR1-ICAM-1/MSCs具有顯著抑制T細(xì)胞增殖的能力，且存在劑量效應(yīng)關(guān)系。
　　2.應(yīng)用PTg與FA免疫C57