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文檔簡介
1、一、PDGF-B在ox-LDL誘導的人臍靜脈內皮細胞中表達的改變
目的:通過氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)作用人臍靜脈內皮細胞,觀察隨著ox-LDL濃度和時間的變化,PDGF-B mRNA和蛋白質的表達改變。
方法:實驗采用不同濃度(0,25,50,100 mg/L)ox-LDL與HUVEC-12內皮細胞共同孵育24h,用逆轉錄聚合酶鏈反應(RT-PCR)和免疫印跡(Western blot)分別檢測 PDGF-B
2、 mRNA和蛋白質的表達改變;然后選擇50 mg/L ox-LDL與HUVEC-12細胞孵育不同時間(0,3,6,12,24h)后,同樣用RT-PCR和Western blot分別檢測PDGF-B mRNA和蛋白質的表達改變;篩選出ox-LDL對PDGF-B表達影響適宜的處理濃度與時間。
結果:隨ox-LDL濃度增加,PDGF-B mRNA和蛋白質的表達趨勢一致,先逐漸上調,當濃度為50 mg/L時,表達水平達峰值,但當濃度為
3、100 mg/L時,表達下降。結合文獻和我們的實驗結果,以下選擇ox-LDL的處理濃度為50 mg/L。隨著ox-LDL處理時間的延長,PDGF-BmRNA和蛋白質的表達逐漸增加,在24h時,達最大值。因此在后續(xù)實驗中選擇50mg/L ox-LDL刺激HUVEC-12內皮細胞24小時,作為促進PDGF-B表達明顯上調的最適濃度與時間。
結論: Ox-LDL可影響HUVEC-12內皮細胞中PDGF-B的表達
二、氨氯地
4、平對ox-LDL誘導的人臍靜脈內皮細胞PDGF-B和NF-κB表達的影響
目的:觀察不同濃度(0,0.1,1.0,10.0μM)氨氯地平對ox-LDL誘導的人臍靜脈內皮細胞中PDGF-B和NF-κB的表達改變。
方法:在第一部分實驗基礎上,我們選擇ox-LDL的處理濃度與時間分別為50 mg/L和24小時,實驗分為5組:對照組、ox-LDL組、(0.1,1.0,10.0μM)氨氯地平預先處理細胞30min后加入50
5、mg/L ox-LDL共同孵育24小時組。用RT-PCR和Western blot分別檢測PDGF-B mRNA和蛋白質的表達及NF-κB的蛋白表達改變;篩選出氨氯地平影響PDGF-B及NF-κB表達的適宜濃度。
結果:隨著氨氯地平濃度增加,細胞PDGF-B mRNA和蛋白質的表達及NF-κB的蛋白表達均逐漸減少,并呈現濃度依賴性,當濃度為10.0μM時作用更明顯。
結論:氨氯地平可下調ox-LDL誘導的HUVEC-
6、12內皮細胞中PDGF-B和NF-κB的表達。
三、氨氯地平和NF-κB抑制劑吡咯烷二硫代氨基甲酸鹽(PDTC)對ox-LDL誘導的人臍靜脈內皮細胞PDGF-B和NF-κB表達的影響
目的:觀察氨氯地平和NF-κB抑制劑吡咯烷二硫代氨基甲酸鹽(PDTC)對ox-LDL誘導的人臍靜脈內皮細胞PDGF-B和NF-κB表達的影響,以分析氨氯地平通過NF-κB通路對ox-LDL誘導的人臍靜脈內皮細胞PDGF-B表達的作用。<
7、br> 方法:在第二部分實驗基礎上,選擇10.0μM氨氯地平和20μM PDTC分別預孵育HUVEC-12內皮細胞30min,再與ox-LDL共同孵育24h,共分為六組:對照組、ox-LDL組、PDTC+ox-LDL組、氨氯地平+ox-LDL組和PDTC、氨氯地平單獨處理組, RT-PCR和ELISA分別檢測細胞PDGF-B的mRNA和蛋白表達, Western blot與免疫細胞化學檢測細胞NF-κBp65的蛋白表達。
結
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