氨氯地平經NF-κB通路下調人臍靜脈內皮細胞PDGF-B的表達.pdf_第1頁
已閱讀1頁,還剩46頁未讀, 繼續(xù)免費閱讀

下載本文檔

版權說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內容提供方,若內容存在侵權,請進行舉報或認領

文檔簡介

1、一、PDGF-B在ox-LDL誘導的人臍靜脈內皮細胞中表達的改變
  目的:通過氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)作用人臍靜脈內皮細胞,觀察隨著ox-LDL濃度和時間的變化,PDGF-B mRNA和蛋白質的表達改變。
  方法:實驗采用不同濃度(0,25,50,100 mg/L)ox-LDL與HUVEC-12內皮細胞共同孵育24h,用逆轉錄聚合酶鏈反應(RT-PCR)和免疫印跡(Western blot)分別檢測 PDGF-B

2、 mRNA和蛋白質的表達改變;然后選擇50 mg/L ox-LDL與HUVEC-12細胞孵育不同時間(0,3,6,12,24h)后,同樣用RT-PCR和Western blot分別檢測PDGF-B mRNA和蛋白質的表達改變;篩選出ox-LDL對PDGF-B表達影響適宜的處理濃度與時間。
  結果:隨ox-LDL濃度增加,PDGF-B mRNA和蛋白質的表達趨勢一致,先逐漸上調,當濃度為50 mg/L時,表達水平達峰值,但當濃度為

3、100 mg/L時,表達下降。結合文獻和我們的實驗結果,以下選擇ox-LDL的處理濃度為50 mg/L。隨著ox-LDL處理時間的延長,PDGF-BmRNA和蛋白質的表達逐漸增加,在24h時,達最大值。因此在后續(xù)實驗中選擇50mg/L ox-LDL刺激HUVEC-12內皮細胞24小時,作為促進PDGF-B表達明顯上調的最適濃度與時間。
  結論: Ox-LDL可影響HUVEC-12內皮細胞中PDGF-B的表達
  二、氨氯地

4、平對ox-LDL誘導的人臍靜脈內皮細胞PDGF-B和NF-κB表達的影響
  目的:觀察不同濃度(0,0.1,1.0,10.0μM)氨氯地平對ox-LDL誘導的人臍靜脈內皮細胞中PDGF-B和NF-κB的表達改變。
  方法:在第一部分實驗基礎上,我們選擇ox-LDL的處理濃度與時間分別為50 mg/L和24小時,實驗分為5組:對照組、ox-LDL組、(0.1,1.0,10.0μM)氨氯地平預先處理細胞30min后加入50

5、mg/L ox-LDL共同孵育24小時組。用RT-PCR和Western blot分別檢測PDGF-B mRNA和蛋白質的表達及NF-κB的蛋白表達改變;篩選出氨氯地平影響PDGF-B及NF-κB表達的適宜濃度。
  結果:隨著氨氯地平濃度增加,細胞PDGF-B mRNA和蛋白質的表達及NF-κB的蛋白表達均逐漸減少,并呈現濃度依賴性,當濃度為10.0μM時作用更明顯。
  結論:氨氯地平可下調ox-LDL誘導的HUVEC-

6、12內皮細胞中PDGF-B和NF-κB的表達。
  三、氨氯地平和NF-κB抑制劑吡咯烷二硫代氨基甲酸鹽(PDTC)對ox-LDL誘導的人臍靜脈內皮細胞PDGF-B和NF-κB表達的影響
  目的:觀察氨氯地平和NF-κB抑制劑吡咯烷二硫代氨基甲酸鹽(PDTC)對ox-LDL誘導的人臍靜脈內皮細胞PDGF-B和NF-κB表達的影響,以分析氨氯地平通過NF-κB通路對ox-LDL誘導的人臍靜脈內皮細胞PDGF-B表達的作用。<

7、br>  方法:在第二部分實驗基礎上,選擇10.0μM氨氯地平和20μM PDTC分別預孵育HUVEC-12內皮細胞30min,再與ox-LDL共同孵育24h,共分為六組:對照組、ox-LDL組、PDTC+ox-LDL組、氨氯地平+ox-LDL組和PDTC、氨氯地平單獨處理組, RT-PCR和ELISA分別檢測細胞PDGF-B的mRNA和蛋白表達, Western blot與免疫細胞化學檢測細胞NF-κBp65的蛋白表達。
  結

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯系上傳者。文件的所有權益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網頁內容里面會有圖紙預覽,若沒有圖紙預覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經權益所有人同意不得將文件中的內容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內容的表現方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內容負責。
  • 6. 下載文件中如有侵權或不適當內容,請與我們聯系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

最新文檔

評論

0/150

提交評論