異丙酚對(duì)LPS刺激的臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞NF-κB活性和ICAM-1表達(dá)的影響.pdf

1、目的:探討異丙酚對(duì)細(xì)菌脂多糖(LPS)刺激之后的臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVECs,下文簡稱EC)的細(xì)胞間粘附分子一1(ICAM一1)表達(dá)和核轉(zhuǎn)錄因子KB活性的影響,以期從基因轉(zhuǎn)錄的調(diào)控水平來探求異丙酚可能的抗炎機(jī)制。 方法:選擇復(fù)蘇后的3～4代HUVECs進(jìn)行轉(zhuǎn)板,隨機(jī)分為六組;(1)對(duì)照組兩組:A<,1>組加入LPS(1ug/ml)刺激2h,A<,2>組加入LPS(1ug/ml)刺激8h:(2)實(shí)驗(yàn)組四組:B。組和B。組先都加入1

2、2S(1ug/m1)再加入異丙酚25umol/l后,分別培養(yǎng)2h和8h;C<,1>組和C<,2>組先都加入LPS(1ug/ml)再加入異丙酚50llmol/l后,分別培養(yǎng)2h和8h。然后提取細(xì)胞的RNA以RT-PCR測(cè)定各組細(xì)胞的ICAM一1的mRNA的表達(dá),提取血液中的多形核中性粒細(xì)胞(PMN),測(cè)PMN與EC的粘附率,以免疫細(xì)胞化學(xué)測(cè)定NF-κ BP<,65>亞基的核陽性表達(dá)細(xì)胞百分率。 結(jié)果: ①PMN與HUVEC

3、s粘附率計(jì)數(shù):不同時(shí)點(diǎn)對(duì)照組A<,1>與A<,2>、實(shí)驗(yàn)組B<,1>與B<,2>、C<,1>與C<,2>之間的PMN-EC粘附率,有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。在LPS刺激2h時(shí)點(diǎn),A<,1>組、B<,1>組、C<,1>組的PMN-EC粘附率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);而LPS刺激8h,B<,2>組、C<,2>組的PMN-EC粘附率分別與對(duì)照組A<,2>比較都顯著降低(P<0.05)。 ②HU'VECs的ICAM一1m

4、RNA的表達(dá)量:對(duì)照組A<,1>與A<,2>、實(shí)驗(yàn)組B<,1>與B<,2>、C<,1>與C<,2>之間的ICAM一1mRNA表達(dá)量，發(fā)現(xiàn)具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。在LPS刺激2h的A<,1>組、B<,1>組、C<,1>組之間的ICAM-1mRNA表達(dá)量差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。而LPS刺激8h后，B<,2>組、C<,2>組的ICAM-1mRNA分別與對(duì)照組A<,2>比較都顯著減少(P<0.05)。 ③細(xì)胞免疫化

5、學(xué)測(cè)NF-K BP<,65>的核陽性表達(dá)：在未加LPS刺激的正常對(duì)照片上NF-KBP<,65>核陽性表達(dá)細(xì)胞幾乎看不到，LPS刺激2h后的對(duì)照組A<,1>的核陽性細(xì)胞率為80.28±6.24％，A<,1>與A<,2>組相比較，二者并無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。B<,1>組與B<,2>組、C<,1>組與C<,2>組之間也無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。LPS刺激2h的B<,1>組、C<,1>組的核陽性細(xì)胞率比對(duì)照組A<,1>顯著降低(P<

6、0.05)；LPS刺激8h后的B<,2>組、C<,2>組的核陽性細(xì)胞率比對(duì)照組A<,2>也有顯著降低(P<0.05)。并且B<,1>組與C<,1>組、B<,1>組與C<,2>組之間都有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。 結(jié)論：1．PMN與HUVECs粘附率隨工CAM-1的表達(dá)增加而增加，ICAM-1的表達(dá)隨NF—kB的激活程度增加而增加。 2．異丙酚能有效抑制LPS刺激HUVECs后NF-KB活性的增加，從而抑制ICAM—l的